Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.10.2012.tde-26112013-112348
Documento
Autor
Nome completo
Mariana Aparecida Fonseca
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2012
Orientador
Banca examinadora
Perecin, Felipe (Presidente)
Ambrosio, Carlos Eduardo
Turco, Edson Guimarães Lo
Título em português
Análise do perfil lipÃdico do sêmen bovino
Palavras-chave em português
Bovino
Espectrometria de massas
Espermatozoide
LipÃdeos
Resumo em português
A composição dos lipÃdeos de membrana está entre os fatores que podem influenciar a capacidade fecundante do espermatozoide. Sabidamente os lipÃdeos desempenham papéis indispensáveis na membrana dos espermatozoides, participando dos processos de interação entre gametas e influenciando o comportamento fÃsico-quÃmico dos espermatozoides durante os procedimentos de criopreservação. Estas moléculas apresentam uma ampla gama de propriedades quÃmicas que tornam complexa a sua análise. Atualmente a espectrometria de massas (MS) por ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI) representa uma potente ferramenta para a análise de lipÃdeos. Assim, a proposta deste trabalho buscou verificar a ocorrência de diferença no perfil lipÃdico de espermatozoides bovinos obtidos por MALDI utilizado técnica de análise direta dos espermatozoides e análise após a extração lipÃdica pelo método de Bligh e Dyer. Além disso, este trabalho analisou o perfil lipÃdico de espermatozóides bovinos que receberam ou não suplementação de antioxidantes. Após coleta, lavagem e separação dos espermatozoide, estes foram submetidos à extração lipÃdica ou destinados Ãntegros à obtenção do perfil lipÃdico (método direto). O perfil lipÃdico do extrato lipÃdico ou de espermatozoides Ãntegros foi adquirido por MALDI em modo positivo e com matriz DHB (ácido dihidroxibenzoico). A análise dos dados foi realizado com o software Metaboanalist utilizando ferramentas de análise multivariada (análise de componentes principais - PCA) e de identificação de Ãons com intensidade diferencial entre grupos de comparação (teste t, volcano plot). Com essas análises foi possÃvel identificar que ocorre diferença no perfil lipÃdico dos espermatozoides bovinos quando obtidos a partir de análise direta ou extração de lipÃdeos. Não foram observadas diferentes entre grupos submetidos ou não à suplementação com vitaminas. O método direto é capaz de proporcionar um perfil lipÃdico representativo e de fácil aquisição.
Título em inglês
Analysis of the lipid profile of bovine semen
Palavras-chave em inglês
Bovine
Lipids
Mass spectrometry
Spermatozoa
Resumo em inglês
The membrane lipid composition is amongst the factors that influence the fertilization competence of the spermatozoa. It is also known that lipids play fundamental roles at spermatozoa membranes, participating in many processes, such as spermatozoaoocyte interaction and determining the physical-chemical behavior of spermatozoa membranes during cryopreservation. These molecules show a wide range of chemical properties, making complex its analysis. Currently, mass spectrometry (MS) through matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) represents a powerful tool for lipids analysis. Hence, this proposal aimed to evaluate differences in bovine spermatozoa lipid profile obtained through MALDI using direct sample analysis of spermatozoa or analysis of spermatozoa lipid extract obtained by Bligh-Dyer technique. Moreover, this proposal evaluated lipid profile of spermatozoa from bull that received or not antioxidant supplementation. After collection, washing and separation, the spermatozoa were submitted to lipid extraction or straightforward destined to lipid profile acquisition (direct method). The lipid profiles of spermatozoa lipid extracts or from whole spermatoloza were obtained by MALDI in positive mode with DHB matrix (dihydrozybenzoic acid). Data analysis was performed with Metaboanalyst software using multivariated analysis (Principal component analysis - PCA) and tools for identification of differential ions between comparison groups (t-test, volcano plot). Results show differences in spermatozoa lipid profile obtained by direct method or after lipid extraction. No differences were observed in bovine spermatozoa derived from bulls supplemented or not with vitamins. The direct method can generate a representative and easily obtained lipid profile.
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Data de Publicação
2014-02-19