Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.2003.tde-26082003-153246
Documento
Autor
Nome completo
Rosana Fátima Zarotti Saciloto
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Piracicaba, 2003
Orientador
Banca examinadora
Gallo, Luiz Antonio (Presidente)
Crocomo, Otto Jesu
Mui, Tsai Siu
Título em português
Inserção do gene PR5K em cana-de-açúcar visando induzir resistência ao fungo da ferrugem Puccinia melanocephala.
Palavras-chave em português
biolística
cana-de-açúcar
ferrugem (doença de planta)
fungos fitopagênicos
genes
plantas transgênicas
resistência genética vegetal.
Resumo em português
A cana-de-açúcar é uma cultura de grande importância econômica para
alguns paises da América especialmente para o Brasil. A mesma apresenta
grandes problemas de ataque de patógenos e dentre eles destaca-se a
ferrugem causada pelo fungo Puccinia melanocephala. O objetivo deste
trabalho foi inserir um gene de resistência ao patógeno através da técnica de
biolística. Calos embriogênicos de cana-de-açúcar da variedade australiana
Q117 sensível à ferrugem, foram bombardeados com partículas de tungstênio
revestidas com o vetor pRGA. Este vetor foi construído empregando-se o
plasmídio pAHC17 que contém o gene da ubiquitina do milho ubi-1, que se
expressa somente em monocotiledônea, o plasmídio pXL3 que contém o gene
de interesse PR5K,relacionado com as PR5 proteínas, envolvida no sistema de
defesa contra microorganismos patogênicos, e o plasmídio pAH9 que contém o
gene neo, que confere resistência ao antibiótico geneticina. A seleção foi feita com o antibiótico geneticina. O plasmídio pRGA foi bombardeado em calos de
cana-de-açúcar com 19 semanas, cultivadas em manitol e sorbitol 4 horas
antes do bombardeamento. Após o bombardeamento, os calos foram
transferidos para meio CI-3 onde ficaram no escuro por 10 dias. Os mesmos
foram transferidos para meio CI-3-2,4-D de regeneração contendo o antibiótico
de seleção geneticina (35 mg/mL). Os calos selecionadas foram repicadas para
meio de cultivo CI-3BAP. As plântulas regeneradas apresentaram um
percentual de 20%. As mesmas foram submetidas à análise de confirmação por
PCR, empregando-se os primers D12 e E01. Pela analise do resultado do PCR,
foi observado que cerca de 1% apresentou banda correspondente ao pRGA
indicando possível transformação, e que várias regiões foram amplificadas em
relação às analisadas.
Título em inglês
Insertion of pr5k gene in sugar cane to induce resistant plants to rust disease fungi puccinia melanocephala.
Palavras-chave em inglês
biolistic
genes
pathogenic fungi
plant genetic resistance.
rust (plant disease)
sugar cane
transgenic plants
Resumo em inglês
The Sugar cane is very important culture for many countries especially
Brazil. This culture however presents many problems with diseases; mainly rust
disease that is spread mechanically and caused by Puccinia melanocephala
fungi. The aim of this work was to get resistant plants with the gene PR5K ,
which is related to PR5 resistant proteins. Embriogenic callus of sugar cane
plants Australian variety Q117 were used in shot gun procedure using tungsten
particles covered by DNA from pRGA vector. The construction were made using
the plasmid pAHC17 that contains the maize ubiquitin gene that is expressed
only in monocotyledons plants, the plasmid pXL3 with PR5K gene related with
PR5 proteins, involved with the defense system in plants. The new plasmid has part of pHA9 that contains the neo gene, which allows the plant to
be resistant to geneticin used in the selection procedure. The plasmid pRGA
was used for the short gum experiments. Callus with 19 weeks were transferred
to manitol and sorbitol media, 4 hours before shooting. After shooting the
calluses were transferred to CI-3-2,4-D media plus geneticin antibiotic
(35 mg/mL). The selected plants were sub cultivated in the CI-3BAP media.
From the total callus used in the shot gun experiments, 20% were selected, and
from this total, 1% gave positive result using the PCR procedure, indicating that
the transformed plants has the pRGA plasmid.
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Data de Publicação
2003-09-12