Neste trabalho estudou-se a purificação de fator VIII de coagulação (FVIII) e da Proteína C (PC) por cromatografia. Em coluna ANX Sepharose FF como primeira etapa de purificação do plasma permite a eluição do FVIII e da PC com bom fator de purificação, mas não a separação destas. Propomos a separação de FVIII e PC empregando cromatografia de afinidade a metal (IMAC) empregando Cu²⁺, Ni²⁺, Zn²⁺, Co²⁺ e Fe³⁺ e dessorção empregando imidazol, cloreto de amônio e variação de pH. Em colunas de Fe³⁺ e Ni²⁺ as proteínas praticamente não se ligaram à resina. Em IMAC-Co²⁺, a PC não é adsorvida pela resina enquanto o FVIII pode ser eluído com imidazol 100 mM. Em IMAC-Cu²⁺ a PC eluiu com imidazol 10mM e o FVIII com 200mM. Não foi possível eluir as proteínas nem com NH₄Cl 1M nem quando o pH foi abaixado até 4,0. Em IMAC-Zn²⁺ a PC não é adsorvida e o FVIII eluiu com imidazol 200mM ou NH₄Cl 1M. Diminuindo-se o pH, a recuperação da atividade do FVIII foi baixa. Concluímos que IMAC-Co²⁺ apresentou os melhores rendimentos e melhores fatores de purificação para as 2 protéinas.

In this work purification methods for the coagulation factor VIII (FVIII) and Protein C (PC) by chromatography was studied. The use of ANX Sepharose FF column as the first purification step allows the elution of FVIII and PC with good purification factors, but not its separation. We propose the separation of FVIII and PC using immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) using Cu²⁺, Ni²⁺, Zn²⁺, Co²⁺ and Fe³⁺ and desorption employing imidazole, ammonium chloride and pH variation. In the columns containing Fe³⁺ and Ni²⁺ metal ions, proteins did not adsorb to the resin. In IMAC-Co²⁺, PC was not adsorbed to the resin, while FVIII could be eluted with 100 mM imidazole. In IMAC-Cu²⁺ PC could be eluted with 10 mM imidazole and FVIII with 200 mM. It was not possible to elute the proteins from IMAC-Cu²⁺ column with either 1M NH₄Cl or when pH was descreased to 4,0. In IMAC-Zn²⁺, PC was not adsorbed and FVIII could be eluted with 200 mM imidazole or 1 M NH₄Cl. We conclude that IMAC-Co²⁺ presented the best yield and purification factors for the 2 proteins.