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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.87.2018.tde-08022018-143046
Document
Auteur
Nom complet
Daniel Akio Fukuda
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2017
Directeur
Jury
Magalhães, Geraldo Santana (Président)
Ishii, Marina
Miyaji, Eliane Namie
Oliveira, João Ezequiel de
Titre en portugais
Identificação da ligação direta de uma Fosfolipase D de Loxosceles gaucho às plaquetas.
Mots-clés en portugais
Loxosceles gaucho
Aranhas
Citometria de fluxo
EGFP
Fosfolipase D
Ligação
Microscopia de fluorescência
Plaquetas
Proteína verde fluorescente
Toxina quimérica
Toxinas
Resumé en portugais
Fosfolipases D (FLD) do veneno das aranhas do gênero Loxosceles são capazes de causar entre outros efeitos, uma forte agregação plaquetária cujo mecanismo ainda não foi elucidado. Portanto, para estudar o papel das FLDs nesta atividade, uma FLD recombinante de L. gaucho (LgRec1) foi fusionada com a proteína fluorescente verde (EGFP) e utilizada como uma sonda para detectar a interação de LgRec1 com plaquetas. Essa quimera, denominada EGFP-LgRec1, manteve as principais características da LgRec1. A microscopia confocal das plaquetas mostrou que LgRec1 não requer componentes plasmáticos para se ligar às plaquetas, embora estes sejam necessários para que a LgRec1 induza agregação. Além disso, foi observado que a ação da LgRec1 leva à exposição de fosfatidilserina. Contudo, esta exposição não está relacionada à morte celular. Portanto, este trabalho mostrou que uma FLD de Loxosceles se liga a plaquetas, promovendo a exposição de fosfatidilserina, possibilitando a ligação de fatores de coagulação e resultando na agregação plaquetária.
Titre en anglais
Identification of direct binding of a Phospholipase D from Loxosceles gaucho to platelets.
Mots-clés en anglais
Loxosceles gaucho
Binding
Chimeric toxin
EGFP
Flow cytometry
Fluorescent microscopy
Green fluorecent protein
Phospholipase D
Platelets
Spiders
Toxins
Resumé en anglais
Phospholipases D (PLD) from spider venom of the genus Loxosceles are capable of causing, among other effects, a strong aggregation of platelets and its mechanism has not yet been elucidated. Therefore, to study the role of PLDs in this activity, a recombinant L. gaucho PLD (LgRec1) was fused with a green fluorescent protein (EGFP) and used as a probe to detect the interaction of LgRec1 with platelets. This chimera, named EGFP-LgRec1, remained the main activities of LgRec1. Platelet confocal microscopy has shown that LgRec1 does not require plasma components to bind to platelets, although these are required for LgRec1 to induce aggregation. In addition, it has been observed that the action of LgRec1 leads to exposures of phosphatidylserine. However, this exposure is not related to cell death. Therefore, this work showed that a Loxosceles PLD binds to platelets, promoting an exposure of phosphatidylserine, that may act as a scaffold for coagulation factors, resulting in platelet aggregation.
 
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Date de Publication
2018-02-08
 
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