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Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.10.2009.tde-21012011-121603
Document
Author
Full name
Patricia Barbosa Salla Cardoso
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2009
Supervisor
Committee
Barnabe, Valquíria Hyppólito (President)
Crusco, Silvia Edelweiss
Góes, Paola Almeida de Araújo
Title in Portuguese
Método de extração para determinação do perfil lipídico do sêmen ovino através do HPLC
Keywords in Portuguese
Extração
HPLC
Ovino
Perfil lipídio
Sêmen
Abstract in Portuguese
Os ovinos domésticos (Ovis aries) estão entre os primeiros animais domesticados para lã, leite, carne e pele. Novas biotecnologias de avaliação e manipulação do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que as membranas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é uma das principais causadoras de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é conseqüente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio que são fisiologicamente produzidas pelo metabolismo celular. Esse quadro pode ser diminuído pela presença de antioxidantes no sêmen, como a vitamina E. O sêmen foi coletado através da técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi centrifugado para a obtenção de duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozóide. Ambas tiveram seus lipídios extraídos por dois métodos diferentes e foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e assim pudemos escolher qual o melhor processo de extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozóide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oléico. Dentre os métodos Folch (1957) modificados estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a extração 1.
Title in English
Extraction method for determination of lipid profile in ram sperm by HPLC
Keywords in English
Extraction
HPLC
Lipid profile
Semen
Sheep
Abstract in English
The domestic sheep (Ovis Aries) is one of the first domesticated animals for wool, milk and meat production. The study of technologies for assessment and handling of semen are in course for the elucidation of male infertility causes. It is well known that damage to the sperm membrane decreases semen quality. Considering that the membranes are composed by a phospholipid bilayer, lipid peroxidation is a major cause of cell damage and explains the importance of studies on lipid components of semen. Lipid peroxidation is a consequence of the reaction between lipids and reactive oxygen species that are physiologically produced by cellular metabolism. This event may be reduced in the presence of antioxidants in semen, such as tocopherol. Semen was collected by artificial vagina and, after sperm evaluation, samples were centrifuged resulting in two fractions: seminal plasma and spermatozoa pellet. Both had their lipids extracted by two different methods and were qualified and quantified for the sensitivity and specificity to the high performance liquid chromatography in order to determine the most efficient extraction technique. Statistical analysis was performed using SAS software for Windows. The predominant saturated fatty acid in sperm is the myristic and the most abundant insaturated fatty acid in both extractions was DHA. In seminal plasma, in both methods, the prevailing fatty acid is the saturated palmitic and the unsaturated oleic. Among the methods evaluated, we obtained the best results of identification and quantification of fatty acids in extraction 1.
 
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Publishing Date
2011-02-15
 
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