O presente trabalho tem por finalidade expor a metodologia a ser empregada num programa de indução de mutações por radiação gama e por mutagênicos químicos, em Eucalyptus. As três espécies estudadas foram:E. tereticornis Sm., E. citriodora Hook e E. maculata Hook. As sementes das três espécies foram tratadas com as seguintes dosagens de radiação gama: O (controle), 10, 20, 30 e 40 KR. Os tratamentos das sementes com soluções de mutagênicos químicos foram os seguintes: (Descrito na Dissertação). As sementes das três espécies de Eucalyptus tratadas com agentes mutagênicos foram semeadas em caixas coletivas de madeira com uma mistura de terra, areia e esterco esterilizados; o experimento foi instalado na casa de vidro do Instituto de Genética, em Piracicaba. Aos 60 dias após a semeadura foi determinado o número de plantas vivas nos vários tratamentos. Com base nos resultados destas contagens determinaram-se os tratamentos que podem ser indicados para um programa de indução de mutações, para as três espécies estudadas de Eucalyptus. A LD₅₀ (dose letal 50%) foi empregada para se estimar o tratamento indicado num programa de mutações induzidas por radiação gama; para os mutagênicos químicos, os tratamentos indicados correspondem aproximadamente as LD₃₀ a LD₅₀. Aos 45 e 60 dias após a semeadura foram realizadas medições das alturas das plantas. Essas medições serviram para estimar se os tratamentos das sementes com agentes mutagênicos aumentam a variabilidade fenotípica em M₁. Para se verificar se havia ou não alguma relação do volume nuclear com a radiosensitividade de de uma determinada espécie, foram medidas os volumes nucleares médios de dois tipos de células, nas três espécies de Eucalyptus: células meristemáticas de raízes e células iniciais de gêmulas do embrião de sementes. Verificou-se a presença de algumas plantas com quimeras albinas, folhas com colorações diferentes das normais, folhas e ramos disformes etc. Estas alterações fenotípicas foram observadas em plantas originadas de sementes tratadas com agentes mutagênicos. Os resultados obtidos podem ser resumidos nos seguintes tópicos: 1) Segundo os dados experimentais a LD₅₀ do E. tereticornis é de 13,2 ± 2,7 KR, a LD₅₀ do E. citriodora é de 19,6 ± 3,1 KR e a LD₅₀ do E. maculata é de 25,2 ± 3,2 KR. Estas são as dosagens de radiação gama recomendadas para um programa de indução de mutações, para as três espécies de Eucalyptus, de acordo com os nossos resultados experimentais. 2) Quanto maior for a dosagem de radiação gama recebida pelas sementes de eucalipto, menor será o desenvolvimento das plantas. O fato das plantas originadas de sementes irradiadas com 30 KR terem um desenvolvimento superior às plantas dos tratamentos com 20 KR, pode ser explicado pela competição entre as mudas, dentro da caixa coletiva. 3) Quanto maior for a dosagem de radiação gama recebida pelas sementes, tanto maior será. a variabilidade na altura das plantas originadas dessas sementes. 4) Para um programa de mutações induzidas por mutagênicos químicos são indicados os seguintes tratamentos das sementes: Óxido de etileno - tratamento com soluções a 0,30% durante 2 horas ou com soluções a 0,15% durante 4 horas, para o E. tereticornis; tratamento com soluções a 0,15% ou 0,30% durante 4 horas, para o E. citriodora; tratamento com soluções a 0,30% durante 4 horas, para o E. maculata. Etileneimina - tratamento com soluções a 0,08% durante 6 horas, para as três espécies de Eucalyptus. Sulfato de dietilo - tratamento com soluções a 0,30% durante 2 horas, para o E. tereticornis e tratamento com soluções a 0,30% durante 4 horas para o E. citriodora e para o E. maculata. Metanosulfonato de etilo - tratamento cem soluções a 0,50% durante 12 horas, para o E. tereticornis e para o E. maculata tratamento com soluções a 0,25% ou 0,50% durante 12 ou 24 horas, para o E. citriodora. Epicloridrina - tratamento com soluções a 0,30% durante 2 horas, para o E. tereticornis e tratamento com soluções a 0,30% durante 4 horas, para o E. citriodora e o E. maculata. 5) O tratamento das sementes das três espécies de Eucalyptus com soluções de etilenoimina, com sulfato de dietilo e com metanosulfonato de etilo estimula o desenvolvimento das plantas, com base nas medições em altura das plantas dos diversos tratamentos, em relação às testemunhas. Convém lembrar que o estímulo no crescimento das plantas causado pelas três drogas citadas talvez não se manifeste em outras condições experimentais. 6) As sementes das três espécies estudadas de Eucalyptus apresentam diferentes sensibilidades aos cinco agentes químicos empregados neste experimento. 7) A variabilidade na altura das plantas originadas de sementes tratadas com mutagênicos químicos não diferiu da variabilidade na altura das plantas testemunhas. 8) Comparando-se as três espécies estudadas de Eucalyptus, a variabilidade das alturas das plantas originadas de sementes tratadas com radiação gama e com mutagênicos químicos não diferiu entre si. 9) De acordo com os nossos resultados experimentais, não é possível predizer-se a rádio sensitividade das sementes das três espécies estudadas de Euçalyptus, com base nas medições dos volumes nucleares de células meristemáticas de raízes e de células iniciais de gêmulas do embrião de sementes. 10) As quimeras albinas, as folhas e ramos deformados observados em plantas originadas de sementes tratadas com agentes mutagênicos, provavelmente são simples alterações fenotípicas e não efeitos de mutações gênicas; as mutações gênicas recessivas manifestam-se na geração M₂.

Seeds of three Eucalyptus species were treated with gamma rays and chemical mutagens. We studied the following species: Eucalyptus tereticornis Sm., E. citriodora Hook and E. maculate Hook. The deses of gamma rays used were: O (control), 10, 20, 30 and 40 KR. Seeds of three species were treated with these chemical mutagens solutions: (See Dissertation). The LD₅₀ (lethal dose 50%) was employed to estimate the best dose of gamma. rays in an induced mutation prcgram. The LD₃₀ - LD₅₀ were used for the chemical mutagens. The lethal dose were determined from survival curves fitted by probit approximation. Survival of seedlings from irradiated se ed 60 days after sowing showed E. tereticornis to be the most radiosensitive with LD₅₀ 13,2 ± 2,7 KR and E. maculata the most radioresistant with a LD₅₀ of 25,2 ± 3,2 KR. E. citriodora showed a LD₅₀ of 19,8 ± + 3,1 KR. The best treatments for an induced mutation program with five mutagenic agents and two Eucalyptus species were obtained 60 days after sowing. The percentage of survival decreased with increasing concentration and time of treatment with the five chemical mutagens. Seedling height were measured 45 and 60 days after sowing. This was made to prove that the mutagenic treatment increased the phenotypic variability in M₁. Interphase nuclear volumes were calculated from measurements of root meristems nuclei and initial cells of terminal apex region in dormant embryo seed nuclei. No correlation between radiosensitivity (LD₅₀) and nuclear volume was found. Thus, more precise radio sensitivity prediction methods for Eucalyptus seed must be devised. Some plants with chlorotic chimaeras leaves, tortuous branches, etc., were observed. The following conclusions are afforded: 1) E. tereticornis showed a LD₅₀ of 13,2 ± 2,7 KR; E. citriodora showed a LD₅₀ of 19,6 ± 3,1 KR and E. maculata showed a LD₅₀ of 25,2 ± 3,2 KR. These are the doses of gamma rays for an induced mutation program. 2) The seedlings height decreased proportionally with the increasing doses of gamma rays. 3) The following treatments with chemical mutagens are indicated for an induced mutation program: Ethylene oxide: 0,30% - 2 hours or 0,15% - 4 hours, for E. tereticornis: 0,15% or 0,30%, 4 hours, for E. citriodora; 0,30% - 4 hours, for E. maculata. Ethyleneimine: 0,08% - 6 hours, for the 3 species. Diethyl Sulphate: 0,30% - 2 hours, for E. tereticornis; 0,30% - 4 hours, for E. citriodora and E. maculata. Ethylmethane sulphonate: 0,50% - 12 hours, for E. tereticornis and E. maculata; 0,25% or 0,50%, 12 or 24 hours, for E. citriodora. Epicloridrine: 0,30% - 2 hours, for E. tereticornis O,30% - 4 hours, for E. citriodora and E. maculata. 4) Treatment of Eucalyptus seeds with ethyleneimine, diethyl sulphate and ethyl methane sulphonated stimulate seedling development. 5) Seeds of three Eucalyptus species showed different sensitivities to several chemical mutagens. 6) Seedling height variability is greater on the higher gamma rays dose treatments. 7) Seedling height variability is uniform in all treatments with chemical mutagens. 8) No correlation between radio sensitivity (LD₅₀) and nuclear volume was found. We cannot use this radio sensitivity prediction method for Eucalyptus. 9) The chlorotic chimaeras and other modifications in M₁ plants are probably phenotypical and not genotypical alterations. Recessive mutations generally appear on M₂ plants. 10) Seedling height variability of the three Eucalyptus species was not different, comparing the treatment with gamma rays and chemical mutagens.