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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.1976.tde-20240522-110319
Document
Auteur
Nom complet
Oswaldo Galvão Brasil
Unité de l'USP
Date de Soutenance
Editeur
Piracicaba, 1976
Directeur
Titre en portugais
Contribuição ao estudo do icetatato-14C como precursor de aminoácidos em folhas destacadas de café (Coffea arábica L cultivar mundo novo)
Mots-clés en portugais
ACETATO CARBONO-14
AMINOÁCIDOS
CAFÉ MUNDO NOVO
FOLHAS
Resumé en portugais
O presente trabalho teve como objetivo estudar o acetato icetatato-14C como precursor de aminoácidos em folhas destacadas de café (Coffea arábica cv. Mundo Novo) originárias de plântulas com quatro pares de folhas definitivas. Lotes de 1,5 grama de folhas foram incubadas com 10 µCi de acetato-1-14C com 10 µCi de acetato-2-14C na ausência de luminosidade. A interrupção da incubação foi feita com HC1 2N nos tempos de 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 e 180 minutos. O CO2 libertado durante os tempos de incubação foi retido em discos, de papel de filtro embebido em hiamina para posterior detecção da radioatividade. O material colhido nos diversos tempos foi homogeneizado em etanol 80% em ebulição. Esse homogeneizado forneceu duas frações, uma solúvel e outra insolúvel em álcool 80%. A fração solúvel, após cromatografia de troca iônica com resinas Dowex 50 x 8 H+ e Dowex 1 x 8 C1- originou as frações aminoácidos livres ácidos orgânicos e açúcares. A fração insolúvel foi tratada com éter etílico separando os lipídeos. O tratamento da mesma fração com hidróxido de sódio 0,5N separou proteínas, a qual por hidrólise ácida forneceu os aminoácidos proteicos. O material resultante dessas extrações constituiu o resíduo seco final. Treze aminoácidos foram separados por cromatografia bidimensional em papel de filtro: ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, glicina, treonina, alanina, tirosina, arginina, valina, metionina, leucina, fenil-alanina e prolina. A radioatividade dos aminoácidos foi determinada pela eluição dos mesmos de um cromatograma e posterior detecção em cintilador para amostras liquidas da Nuclear Chicago. Pelos resultados obtidos podemos concluir que acetato-14C foi metabolizado por Folhas destacadas de café. Tanto acetato-1-14C como acetato-2-14C forneceram esqueleto carbônico para os principais compostos do metabolismo celular, tais como, açucares, ácidos orgânicos, lipídeos, proteínas e aminoácidos. O aparecimento desses compostos marcados indicou que o acetato, na sua forma ativada está relacionado com os processos de síntese da folha. A alta atividade especifica encontrada em ácidos orgânicos e CO2 mostrou que, conjuntamente com os processos de síntese, ocorreu uma utilização do acetato para produção de energia via ciclo de Krebs. A utilização do acetato via ciclo de Krebs e sua possível utilização no reverso da glicólise para produção de glicose e celulose, possibilitou a marcação de substratos que são vias de síntese de aminoácidos. Pode-se concluir pelos resultados que a molécula do acetato contribuiu para a formação das moléculas dos aminoácidos, sendo o carbono metílico mais incorporado que o carbono carboxílico.
Resumé en anglais
The objective of the present work was the studying of acetate 14C as the forerunner of aminoacids in detached leaves of coffee (Coffea arabica cv Mundo Novo) from plants of four pairs of definitive leaves. Amounts of 1.5 gr of leaves were put in a solution of 10 µCi of acetate 14C and 10 µCi of acetate 2-14C, out of luminosity. The incubation cut was made by means of HC1 with a timing of 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 and 180 minutes. The released CO2 was retained in filter paper discs with hiamine for further radioactivity detection. The collected material al those scheduled timing was homogenized in 80% ebullition alcohol. This, furnished two fractions, soluble and insoluble in 80% alcohol. The soluble fraction gave origin to free aminoacid fractions, organic acids and sugars, after ionic change cromatography in Dowex 50 x 8 H+ and Dowex 1 x 8 C1- resines. The insoluble fraction was treated with ether, separating the lipids. The treatment of this same fraction with NaOH 0.5N separated proteins, which through acid hydrolysis, furnished proteic aminoacids. The wasted material from these extractions became the final dried remainder. Thirteen aminoacids were separated by bidimensional filter paper cromatography: aspartic acid, glutamic acid, serine, threonine, alanine, tyrosine, arginine, valine, methionine, leucine, phenylalamine and proline. The aminoacids radioactivity was deternubed by eluition from a chromatogram and further detection in a Nuclear Chicago Liquid Scintillation Counter. Through the obtained results, it is possible to conclude that acetate 14C was metabolized by coffee detached leaves. Both, acetate-1-14C and acetate-2-14C furnished carbonic skeleton to the main compounds of cellular metabolism, such as, sugars, organic acids, lipids, proteins and aminoacids. These indicated that the activated acetate was related to the processes of leaf synthesis. The high specific activity found in organic acids and CO2, showed that, together with the synthesis processes, an utilization of acetate for energetical production via Krebs cycle was done. The utilization of acetate via the Krebs Cycle and its use in glycolysis reversal to the yield of glycose and cellulose, made possible the coming out of labeled substracts which are pathways to aminoacids synthesis. The obtained conclusions from the dates show that the acetate molecules contributed for the aminoacids molecules structure, being methylic carbon more incorporated than the carboxylic carbon.
 
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Date de Publication
2024-05-22
 
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