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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.1980.tde-20220207-215143
Documento
Autor
Nome completo
Gilberto Lage
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Piracicaba, 1980
Orientador
Título em português
Autoradiografia quantitativa a nível de microscopia eletrônica em células de fumo (Nicotiana tabacum L.) infectadas com vírus do anel do pimentão
Palavras-chave em português
AUTORRADIOGRAFIA
CÉLULAS VEGETAIS
FUMO
MICROSCOPIA ELETRÔNICA
VÍRUS DO ANEL DO PIMENTÃO
Resumo em português
Na presente Dissertação foram abordados diversos problemas correlacionados com a replicação do RNA do vírus do anel do pimentão (VAP), sua translocação e sua associação com os mitocôndrios. Antes dessa abordagem foram examinados alguns aspectos fundamentais para se atingir os objetivos propostos. Dentre eles destacam-se: a) o efeito da actinomicina D (AMD) sobre as áreas do nucléolo, núcleo e citoplasma das células de fumo sadias e infectadas pelo vírus do anel do pimentão. Nesse estudo notou-se marcante a AMD, que reduziu as áreas do nucléolo e do núcleo das células sadias. Os testes estatísticos indicaram que na presença do VAP apenas o nucléolo sofria semelhante redução. O AMD provocou também uma inibição indireta da síntese do RNA viral; b) O resultado prévio do estudo comparativo entre a determinação das áreas celulares pelo método dos círculos e planimetria permitiu a opção pelo primeiro método, que torna simples e rápida a obtenção das densidades de grãos de prata; c) A proporção das densidades de grãos de prata do nucléolo e núcleo contra a densidade dos mesmos no citoplasma das células tratadas com AMD guardaram a seguinte relação 14,5:3,5:1, respectivamente. Estas proporções corroboram a idéia de que a biossíntese do RNA das duas partículas da população do VAP (55 e 220nm) deve se dar no nucléolo; d) Obtenção do valor do HD (Ralf-distance) para as nossas condições, com um valor aproximado de 2000 Angstrons. Com respeito à translocação e associação do VAP com os mitocôndrios das células hospedeiras, a aplicação do modelo matemático proposto por NADLER permitiu obter duas informações básicas: a primeira mostrou que no sistema VAP-mitocôndrio associados, os grãos de prata cobrindo os dois componentes eram predominantemente formados pelo RNA radioativo do VAP (78%) e a segunda diz respeito ao tempo necessário para síntese do RNA, maturação e translocação do vírus até os mitocôndrios. Esse tempo que coincidiu com o do tratamento U - 5 - 3H e indicou que, embora o processo de síntese e translocação possa ser menor, essas várias etapas podem se completar dentro de 5 horas. Os resultados obtidos com o método usado além de mostrar a viabilidade do mesmo para o sistema VAP - mitocôndrio parece bastante promissor na solução de problemas semelhantes com outros vírus ou até mesmo, solução para alguns aspectos biossintéticos e de translocação de compostos com hormônios e enzimas em células normais.
Título em inglês
Quantitative autoradiography at electronic microscopy level of tobacco cells (Nicotiana tabacum L.) infected by pepper ringspot virus
Resumo em inglês
In this work several problems correlated with the RNA replication of the pepper ringspot virus, its translocation and its association with mitochondria were studied. Some basic aspects were examined before the beginning of this work to give the means to reach the proposed objectives: a) The actinomycin D (AMD) effects on parts of the nucleolus, nucleus and cytoplasm of healthy cells and cells infected with the pepper ringspot virus. In this study were noted that the presence of AMD reduced in the healthy cells the area of the nucleus and nucleolus. Statistics tests showed that in the presence of virus only the nucleolus presented similar reduction in its area. The AMD caused also an indirect inhibition of the RNA viral synthese; b) The previous result of the comparative study between the circle method and the planimetry method to determine the cell areas, conducted to the choose of the first method because it makes easy to obtain the silver grains density with the same precision; c) The silver grains density proportion between nucleulus, nucleus and cytoplasm of the cells treated with AMD, presented the following relation 14,5:3,5:1, respectively. This proportion corroborate the idea that the biosynthese of the DA of the two particles of the virus population (55 and 220nm) takes place in the nucleolus; d) Determination of the HD (Half-Distance) for our conditions, with an approximated value of 2000 Angstrons. With respect to the translocation and association of the virus with the mitochondria in the host cells the use of the mathematical model proposed by NADLER gave two basic informations. First it showed that in the mitochondria associated system the silver grains covering the two components were predomiantely constituted by the RNA of the virus radioactive (78%). The second is concerning to the necessary time for the RNA synthese, the virus maturity and its translocation to the mitochondria. This time checked by U - 5 - 3H treatment showed that the synthese process and the translocation could be shorter than 5 hours. The results obtained with the used method, shows that it could be used for the virus-mitochondria system for other virus and it comes also to be the good solution for some biosynthetic aspects of compounds like hormones and enzymes in normal cells.
 
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LageGilberto.pdf (14.06 Mbytes)
Data de Publicação
2022-02-07
 
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