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Thèse de Doctorat
DOI
https://doi.org/10.11606/T.11.1990.tde-20210104-182852
Document
Auteur
Nom complet
Pedro José Valarini
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Piracicaba, 1990
Directeur
Titre en portugais
Método para detecção de Xanthomonas campestris pv. phaseoli em sementes de feijão
Mots-clés en portugais
BACTÉRIAS FITOPATOGÊNICAS
CRESTAMENTO BACTERIANO COMUM
FEIJÃO
SEMENTES
Resumé en portugais
No Brasil, o crestamento bacteriano comum causado por X. campestris pv. phaseoli tem sido incluído entre as principais doenças do feijoeiro devido à sua ampla distribuição, a redução na produção e dificuldades de controle agravadas pelo fato de seu agente causal ter a semente como seu principal meio de disseminação e sobrevivência. Considerando que não se dispõem de métodos recomendados para detecção de X. campestris pv. phaseoli em sementes de feijão, no Brasil, e que o controle se baseia, principalmente, nas inspeções de campos, o presente trabalho teve como principal objetivo, desenvolver uma metodologia eficiente para detecção desse patógeno, avaliar a sua incidência em amostras de sementes certificadas de feijão produzidas no Estado de São Paulo, estabelecer correlação entre a ocorrência do crestamento bacteriano comum em campo com o transporte do patógeno pelas sementes e determinar o seu efeito sobre a germinação e o peso de 100 sementes. Para tal, quatro técnicas de extração e três métodos de identificação do patógeno foram comparados a partir de amostras de sementes sabidamente portadoras do patógeno. As técnicas de extração da bactéria implicaram na imersão em água destilada ou em meio líquido esterilizados, de sementes moídas ou inteiras com desinfestação superficial ou não, em solução de hipoclorito de sódio (1% de cloro ativo), que foram incubadas por períodos variáveis de 2 horas, em temperatura ambiente (sementes moídas) a 18-24 horas, à temperatura de 5-10°C (sementes inteiras). Os métodos de identificação comparados foram: inoculação em plantas indicadoras, isolamento direto em meios de cultura e técnicas serológicas. Para a inoculação em folhas primárias de plantas com 8 dias de idade, foram comparados três cultivares de feijoeiro (CNF 0010, Rosinha G-2 e Cornell 49-242) e três técnicas de inoculação (agulhas múltiplas, incisão com tesoura e injeção no nó da folha primária). Os meios nutriente-glucose-agar (NGA) e extrato de levedura, peptona, glucose, amido solúvel e agar (EPGA), acrescidas do antibiótico cefalexina e do fungicida clorotalonil, nas concentrações de 40 e 67 μg/ml dos produtos comerciais, respectivamente, foram incluídos nos testes de isolamento direto. Com relação a serologia, compararam-se as técnicas da microprecipitina em placas de petri e da dupla difusão em gel-de-agar. Os resultados mostraram que a detecção de X. campestris pv. phaseoli, incluindo a extração através da imersao em água destilada esterilizada de sementes inteiras a 5 – 10°C por 18-24 horas e identificação do patógeno através de inoculação em plantas indicadoras (cv. CNF 0010), por incisão com tesoura, foi o método mais adequado para detectar e quantificar o patógeno em sementes de feijão. Esse método apresentou-se eficiente para detecção da bactéria em um prazo relativamente curto (8-10 dias), de fácil execução, baixo custo, com sensibilidade de 0,1% e de alta especificidade, permitindo analisar cerca de 10 amostras/técnico/dia, o que sugere a sua aplicação prática em análises de rotina e, possivelmente, em programas de certificação de sementes de feijão. A germinação e o peso de 100 sementes foram reduzidos significativamente devido à presença de patógeno na semente. Não se verificou uma correlação consistente entre a incidência do patógeno em campo e na semente. A maioria das sementes certificadas produzidas no Estado de São Paulo, durante os cultivos da “seca” e de “inverno” de 1988 e das “águas” de 1988/1989, foram portadoras de X. campestris pv. phaseoli em índices variando de 0,1 a 1,1%, inóculo na semente que pode originar epidemias no campo, sob condições climáticas favoráveis à doença, justificando mais uma vez, a conveniência da aplicação desse método para detecção de X. campestris pv. phaseoli em sementes de feijão.
Titre en anglais
Method for detection of Xanthomonas campestris pv. phaseoli in common beans
Mots-clés en anglais

Resumé en anglais
In Brazil, common blight of bean caused by Xanthomonas campestris pv. phaseoli has been included among the major bean diseases because of its large distribution, yield reduction and difficulties of control. The importance of this disease is increased by the bacterial survival and dissemination mainly through the seeds. Considering that there is no recommended method for routine detection of this bacterium in bean seeds and that, in Brazil, the control is based mainly on seed field inspection, the present work had as main purpose to develop efficient methodology for routine detection of Xanthomonas campestris pv. phaseoli in bean seeds. It also intended to evaluate the incidence of Xanthomonas campestris pv. phaseoli in certified seeds of common bean produced in the the State of São Paulo, to investigate the correlation between field common blight occurrence and the pathogen incidence on seeds and to determine its effect on germination and 100 seeds weight. Four bacterium extraction techniques and three identification methods were compared by using bean seeds samples that were know to carry the pathogen. The techniques for bacterial extraction constituted of immersion of whole seeds in distilled water or sterilized liquid medium with or without previous seed superficial disinfestation with sodium hypochloride solution (1% active chlorine). For ground seeds, the incubation was at room temperature during two hours and for whole seeds at 5-10°C during 18-24 hours. The following methods were compared for bacterium identification: inoculation on indicator plants, direct isolation on agar media and serology techniques. For selecting the best cultivars and inoculation techniques to be used, experiments were performed with 8 days old seedlings of CNF 0010, Rosinha G-2 and Cornell 49-242 cultivars by using multiple needless, scissor incision and injection ate the primary leaf node. Glucose-nutrient-agar (GNA) and yeast extract-peptone-glucose + soluble potato starch and agar (LPGA) with the antibiotic cephalexin and the fungicide chlorothalonil were used indirect isolation essays. Concerning serology, the microprecipitin in Petri dishes and the agar-gel double-diffusion techniques were compared. A survey on the incidence of X. campestris pv. phaseoli on bean seeds was carried out using samples which were harvested from inspected fields of several locations of the State of São Paulo. Results showed that the recommended method for detecting and quantifyin X. campestris pv. phaseoli in bean seeds was extraction by immersion of whole seeds in distilled and sterilized water, incubation at 5-10ºC for 18-24 hours and pathogen identification by inoculating indicator plants of cv. CNF 0010 by scissor incision. This method was efficient for detecting the bacterium in relatively short time (8-10 days). It is of easy execution, cheap, with sensitivity of 0,1% and of high specificity; it allowed to analyse about 10 samples/technician/day. Therefore, its application can be suggested for routine bean seed health tests in certification programmes. Germination and 100 seeds weight were significantly reduced by the bacterium in the seeds. Correlation between common blight incidence at field and the pathogen incidence on seed was not clear. Most of the certified seed produced in the State of São Paulo from 1988 dry and winter seasons and 1988/89 rainy season carried the bacterium, the incidence levels varied from 0,1 to 1,1%. This amount of inoculum in seeds may be enough to develop epidemics what justify once more the convenience of applying the method developed in this work for detection of X. campestris pv. phaseoli in bean seeds in order to reject lots carrying the bacterium.
 
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Date de Publication
2021-01-07
 
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