Na presente tese foi estudado o local de replicação do RNA do vírus do Anel do Pimentão (VAP) associando-se as técnicas de auto-radiografia e microscopia eletrônica. Tecidos foliares de Nicotiana tabacum L, var. Turkish NN sadios e com VAP foram incubados com Actinomicina D (AMD) ou agua e a seguir tratadas com uridina tritiada (atividade específica 29,2 curies/m mol) durante três intervalos de tempo, 3, 5 e 9 horas. Depois de fixados com glutaraldeido e ácido ósmico foram desidratados com acetona 30, 50, 70, 90 e 100% e incluídos em resina Epon. Os cortes ultrafinos e semifinos foram cobertos com emulsão fotográfica e apôs tempo de exposição adequado foram revelados e examinados. A produção de grãos de prata reduzida (grãos ) devido a incorporação de uridina -5-³H (U-5-³H) no RNA permitiu contagens que, analisadas quantitativamente, serviram para identificar o local de replicação do RNA viral. Os resultados obtidos indicaram que: 1. O efeito dos tratamentos utilizados sobre as áreas médias das secções das células foliares e as áreas médias de seus constituintes não apresentam diferença estatística significativa a nível de 1% de probabilidade. 2. A densidade dos grãos de prata da célula afetada pelo VAP e tratada com água indica que a síntese de RNA sofre uma redução no período de 3 a 5 horas de incubação com U-5-³H e que a taxa de redução no período de 5 a 9 horas é semelhante entre célula doente e sadia. 3. O tratamento dos tecidos foliares sadios e doentes com AMD revelou que a ação do antibiótico foi seletiva no sentido de inibir a polimerase dependente do DNA e não a replicasse do RNA viral, permitindo acompanhar com melhor aproximação o curso da biossíntese do RNA do VAP. 4. O estudo do comportamento individual de três regiões da célula sadia ao tratamento com AMD, mostrou, pela comparação dos números de grãos de prata por unidade de área, que a atividade de síntese do RNA no nucléolo foi a mais inibida pelo antibiótico, seguindo-se a do citoplasma e a do núcleo. 5. As densidades dos grãos de prata das organelas da célula afetada tratada com AMD e corrigidas com respeito às densidades da célula sadia inibida com AMD, mostraram que o curso da biossíntese do ácido nucléico no núcleo (excluindo o nucléolo) e no citoplasma é bastante semelhante, diferindo do processo biossintético do RNA no nucléolo. 6. Examinando as taxas de síntese do RNA da célula afetada pelo VAP, tratada com AMD e corrigida com os respectivos valores da célula sadia nas mesmas condições e no período de 3 a 5 horas, observou-se que a taxa de síntese no nucléolo é aproximadamente três vezes a do citoplasma e a do núcleo sem nucléolo. 7. Os dados da tese sugerem que embora alguma síntese do RNA ou ácidos nucléicos devidos a presença do VAP possa ocorrer no núcleo da célula infectada, o nucléolo é o local principal da biossíntese do RNA do VAP. 8. As auto-radiografias revelaram também que a translocação do RNA marcado do VAP já pode ser observada nas proximidades do mitocôndria no período de 5 horas de tratamento com U-5-³H.

Location of the replication of the RNA of the Virus Anel do Pimentão (VAP) has been studied using both autoradiograph and electron microscope techniques. Foliar tissues of Nicotiana tabacum L. var. Turkish NN, healthy and infected with VAP, were incubated with Actinomicina D (AMD),or water and then treated with tritiated uridine (specific activity 29.2 Ci/mmol) during three different time intervals - 3, 5 and 9 hours. After being fixed with glutaraldehyde and osmic acid they were dehydrated with 30, 50, 70, 90 and 100% acetone and embedded in Epon resin. The ultra-thin and semi-thin sections were covered with photographic emulsion and after adequate exposure they were developed and examined. The production of reduced silver grains (grains) due to the incorporation of uridine-5-³H (U-5-³H) in the RNA, made possible countings which, analysed quantitatively, helped in the identification of the location of the replication of the virus RNA. Results obtained indicated that: 1. The effect of the treatments on the area of the foliar cells and on the area of their constituents presented no significant difference at a level of 1% probability. 2. The silver grain density on VAP infected cell treated with water presented some decrease during 3 - 5 hours incubation with U-5-³H and similar behavior during 5-9 hours between healthy and diseased cells. 3. Treatment of healthy and infected foliar tissues with AMD revealed that the action of the antibiotic was selective as far as inhibition of the DNA dependent polymerase and not on the replicase of the virus RNA, allowing to follow with a better approximation, the development of the RNA biosynthesis of the VAP. 4. Study of the response of three regions of a healthy cell to treatment with AMD indicated that the most inhibited activity was the RNA synthesis in the nucleolus, followed by that of the cytoplasm and of the nucleus. 5. The grain density obtained for regions of an infected cell treated with AMD and corrected in relation to the densities of a healthy cell inhibited with AMD, indicated that the biosynthesis of the nucleic acid in the nucleus excluding the nucleolus, and in the cytoplasm is identical, differing from the biosynthetic process of the RNA in the nucleolus. 6. When studying the rate of the synthesis of the RNA in a cell infected with VAP and treated with AMD and corrected according to the respective values for a healthy cell under same conditions and for a period of 3-5 hours, it was observed that the rate of synthesis of the nucleolus is approximately three times that of the cytoplasm and of the nucleus without nucleolus. 7. The data presented suggest that, although some synthesis of the RNA or nucleic acids due to the presence of VAP can occur in the nucleus of an infected cell, the nucleolus is the main place of the biosynthesis of the RNA of the VAP. 8. The autoradiographs revealed that the translocation of the labelled RNA of the VAP can already be noted close to the mitochondria in a period of 5 hours treatment with U-5-³H.