Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.2004.tde-25032004-141235
Document
Author
Full name
Luiz Fernando Caldeira Ribeiro
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Piracicaba, 2003
Supervisor
Committee
Bedendo, Ivan Paulo (President)
Maringoni, Antonio Carlos
Massola Júnior, Nelson Sidnei
Title in Portuguese
Detecção e identificação molecular de um fitoplasma do grupo 16SrIII em plantas de maçã com sintomas de lenho mole.
Keywords in Portuguese
fitoplasma
lenho mole
maçã
superbrotamento
Abstract in Portuguese
Entre os problemas fitossanitários da maçã (Malus spp)
estão o superbrotamento e o lenho mole, doenças associadas a
fitoplasma. Para o caso do lenho mole, ainda não é totalmente aceito
que um fitoplasma seja o agente causal. No entanto, vários trabalhos,
usando microscopia eletrônica e enxertia de tecidos, têm apontado
para a natureza fitoplasmática da doença. Mais recentemente, um
fitoplasma do grupo 16SrI foi detectado em plantas de maçã
cultivadas no Canadá e na República Checa. No Brasil, o lenho mole
ocorre em vários estados do sul do país, sendo que pesquisas
conduzidas com microscopia eletrônica e testes biológicos de
transmissão por enxertia também têm evidenciado um possível
fitoplasma associado à doença. O objetivo do presente trabalho foi
contribuir para o conhecimento da etiologia destas doenças. Para isto, três plantas de maçã com sintomas de lenho mole, cultivadas em
pomar instalado na região de Vacaria/RS, foram amostradas visando
a detecção de fitoplasma, bem como a sua identificação e posterior
classificação. Para detecção, foi empregada a técnica de PCR duplo
com os oligonucleotídeos R16mF2/mR1 e R16F2n/R2. A identificação
foi através de PCR com os oligonucleotídeos R16(III) F2/R1 e da
técnica de RFLP com as enzimas de restrição AluI, HhaI, KpnI, HinfI,
HpaII, MseI, RsaI e Sau3AI. Os resultados mostraram a presença de
fitoplasma em 29 das 54 amostras coletadas durante o ano de 2000.
As amostras de ramos e raízes coletadas no período de janeiro - abril
e setembro - outubro apresentaram consistentemente fitoplasma em
seus tecidos. Nas amostras colhidas em junho - agosto não houve
detecção do microrganismo. A identificação molecular revelou que o
fitoplasma presente em plantas sintomáticas pertencia ao grupo
16SrIII, sendo os resultados de PCR confirmados pela aplicação de
RFLP. As análises de RFLP permitiram também determinar que este
fitoplasma é, possivelmente, um membro do sub-grupo B. A
constatação de um fitoplasma de grupo 16SrIII associado ao lenho
mole em plantas de maçã cultivadas no Brasil, reforça as evidências
relatadas em outros trabalhos, de que um fitoplasma seja o agente
causal da doença. O fato de um fitoplasma diverso do grupo 16SrI
estar associado ao lenho mole no Brasil pode ser justificado pela
diversidade destes molicutes, em função da região geográfica e da
variedade do hospedeiro.
Title in English
Detection and molecular identification of a phytoplasma of the group 16sriii in apple plants with rubbery wood symptoms.
Keywords in English
apple
phythoplasma
poliferation
rubbery wood
Abstract in English
The proliferation and rubbery wood diseases which are
associated with phytoplasma are some of the diseases that occur in
apple trees (Malus spp). In the case of rubbery wood disease,
phytoplasm is not totally accepted as its causal agent. However,
several researches by using electron microscopy and tissue grafting,
have been able to show the phytoplasma associated with that disease.
Recently, a phytoplasma from group 16SrI was detected in apple
plants grown in Canada and Czech Republic. In Brazil, rubbery wood
occurs in several states of the south region. Results obtained through
electron microscopy and transmission biological tests using grafiting
have shown a possible phytoplasma associated to the disease. The
purpose of the present work was to contribute for the knowledge of
that disease aetiology. Thus tissue samples from three apple plants
exhibiting rubbery wood symptoms, grown at an orchard installed in the region of Vacaria/RS, were obtaind for phytoplasma detection,
identification and classification. Nested PCR technique with
R16mF2/mR1 and R16F2n/R2 primers was emploed to detect
phytoplasma. PCR with R16(III) F2/R1 primers and RFLP technique
with the restriction enzymes Alu I, Hha I, Kpn I, Hinf I, Hpa II, Mse I,
Rsa I and Sau 3AI were used to phytoplasma indentification. The
results showed that phytoplasma occurred in 29 of the 54 samples
collected in the year of 2000. Branches and root samples obtained
from January to April and from September to October exhibited
phytoplasma in their tissues. In tissue samples collected from June to
August, the microorganism has not been detected. The molecular
identification revealed that the phytoplasm from symptomatic plants
belonged to the group 16SrIII and the PCR results were confirmed by
RFLP technique. Based upon the RFLP analyses it can be suggested
that this phyoplasma is a member of the sub-group B. The occurrence
of a phytoplasm of group 16SrIII associated to rubbery wood in apple
plants grown in Brazil, reinforces the evidences related in other
works, that a phytoplasm is the causal agent of that disease. The fact
that a phytoplasm diferent from 16SrI group is associated to rubbery
wood diseases in Brazil can be justified for the diversity of these
mollicutes, due to geographical area and host.
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Publishing Date
2004-03-29