Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.2004.tde-25032004-142853
Document
Auteur
Nom complet
Ana Paula de Oliveira Amaral Mello
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Piracicaba, 2003
Directeur
Jury
Bedendo, Ivan Paulo (Président)
Maringoni, Antonio Carlos
Camargo, Luis Eduardo Aranha
Titre en portugais
Identificação molecular de fitoplasma associado ao enfezamento do tomateiro (Lycopersicon esculentum) e da berinjela (Solanum melongena).
Mots-clés en portugais
berinjela
enfezamento(doença de planta)
fitoplasma
marcador molecular
tomate
Resumé en portugais
Fitoplasmas, procariotos sem parede celular e habitantes de
floema, têm causado danos consideráveis em diversas culturas comercialmente
importantes. A associação desses fitopatógenos com várias doenças que
ocorrem em espécies hortícolas têm sido comumente registradas tanto no
território brasileiro como em outras regiões do mundo. Em áreas de plantio
comercial, na região de Piracicaba-SP e Bragança Paulista-SP, plantas de
tomate e berinjela apresentando porte reduzido, clorose foliar acentuada,
produção exagerada de pequenos ramos, desenvolvimento anormal do cálice,
encurtamento de entre-nós, redução no tamanho de folhas, flores e frutos, que
podem ser traduzidos em sintomas de enfezamento, foram observadas
evidenciando infecção por fitoplasma. Através da técnica de duplo PCR
utilizando os oligonucleotídeos universais R16 mF1/mR2 e R16 F2n/R2, fragmentos de DNA de 1,2 Kb foram amplificados de amostras sintomáticas,
demonstrando a presença de fitoplasma nos tecidos das plantas. Nenhum
fragmento foi detectado em plantas sadias. O exame de tecidos do floema de
plantas sintomáticas, submetidos ao microscópio eletrônico de transmissão,
revelou a presença de corpúsculos pleomórficos no interior dos vasos,
corroborando com os resultados da detecção através de PCR. O uso de
oligonucleotídeos específicos para identificação demonstrou a ocorrência de
fitoplasmas afiliados ao grupo 16SrIII, tanto em tomate quanto em berinjela.
Análises de RFLP, usando as enzimas de restrição AluI, MseI, HpaII, KpnI,
RsaI, HhaI e MboI, confirmaram a ocorrência de fitoplasmas do referido grupo
em ambas as espécies vegetais. Para confirmar os resultados de RFLP, os
fragmentos de DNA de 1,2 Kb dos fitoplasmas presentes em tomate e berinjela,
amplificados com o par de iniciadores R16 F2n/R2, foram clonados em
Escherichia coli para a determinação de suas seqüências de nucleotídeos. Os
fragmentos clonados sequenciados foram comparados, por homologia de
nucleotídeos, entre si e com isolados cujas seqüências já haviam sido
depositadas no "GenBank". O resultado do sequenciamento revelou
heterogeneidade das seqüências do gene 16S rDNA ocorrendo em alguns
isolados, demonstrando e confirmando a variabilidade genética de organismos
do grupo 16SrIII presentes no Brasil.
Titre en anglais
Molecular identification of phytoplasma associated to tomato (Lycopersicon esculentum) and eggplant (Solanum melongena) stunting.
Mots-clés en anglais
eggplant
phytoplasma
stunt
tomato
Resumé en anglais
Phytoplasmas are cell wall-less prokaryotes and phloem-
inhabitants. They caused considerable damages in some commercially
important crops in the Brazilian territory and others regions of the world. It has
been observed in the region of Piracicaba and Bragança Paulista, São Paulo
State, commercial fields of eggplant and tomate showing reduced size,
extensive chlorosis, proliferation of axillary buds, abnormal development of
calyx, internode shortening and small leaves, flowers and fruits. These
symptoms can be translated by stunting, making clear the phytoplasma
infection. Presence of phytophasm was confirmed by nested PCR assay with
the universal primer R16 F2N/R2 where DNA fragments of 1.2 kb were amplified
from symptomatic samples. No fragments was observed in healthy plants.
Analysis of symptomatic plants phloem tissue when submitted to electron
microscope of transmission, disclosed the presence of pleomorphic bodies inside the tissues, corroborating with the results of detection by PCR assay. The
use of specific primers for groups demonstrated the phytoplasmas occurrence
associated to the 16SrIII group, in both tomato and eggplant. RFLP analyses
using AluI, MseI, HpaII, KpnI, RsaI, HhaI and MboI restriction enzymes
confirmed the occurrence of phytoplasmas on 16SrIII group in both plant
species with typical stunting symptoms. The products of 1.2 kb of tomato and
eggplant isolates amplified with the pair of primers R16 F2n/R2, were cloned in
Escherichia coli to determine nucleotides sequence and to confirm the RFLP
results. The nucleotide sequences were compared by homology and with
isolates whose sequence have been already deposited in the "GenBank". The
results revealed 16S rRNA sequence heterogeneity occurring in some isolates
showing the genetic variability of group 16SrIII phytoplasma in Brazil.
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Date de Publication
2004-03-29
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