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Mémoire de Maîtrise
DOI
10.11606/D.11.2009.tde-10022009-094528
Document
Auteur
Nom complet
Fabiana Rezende Muniz
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Piracicaba, 2008
Directeur
Jury
Mourão Filho, Francisco de Assis Alves (Président)
Harakava, Ricardo
Rezende, Jorge Alberto Marques
Titre en portugais
Caracterização molecular e avaliação da resistência ao vírus da tristeza dos citros (CTV) em plantas transgênicas de laranja 'Valência' (Citrus sinensis L. Osbeck)
Mots-clés en portugais
ELISA
Frutas cítricas
Genética molecular vegetal
Plantas transgênicas
Resistência genética vegetal
Tristeza cítrica.
Resumé en portugais
No Brasil a citricultura está entre as culturas de maior importância. A produtividade dessa cultura no país ainda é considerada baixa e esse fato se deve, em parte, a diversas pragas e doenças. Dentre as doenças, tem-se a tristeza, causada pelo Citrus tristeza virus (CTV). Esse patógeno também pode estar relacionado com outra importante doença da cultura, a morte súbita dos citros (MSC). Com isso, o CTV ganhou ainda maior expressão. Uma alternativa para controlar viroses de plantas é a obtenção de plantas transgênicas resistentes a esses patógenos. Este trabalho objetivou caracterizar com análise molecular e avaliar a resistência ao CTV de plantas transgênicas de laranja Valência (Citrus sinensis L. Osbeck), contendo fragmentos do genoma do CTV, em três construções gênicas diferentes. A transgenia das plantas foi confirmada por análises de Southern blot. A transcrição do transgene foi avaliada por RT-PCR. O material foi inoculado com duas borbulhas infectadas pelo isolado Pêra- IAC, enxertadas no porta-enxerto abaixo do ponto de enxertia da copa transgênica, e pelo vetor Toxoptera citricida infectado. Após quatro semanas da inoculação, para avaliar a resistência ao vírus, brotações da copa transgênica foram submetidas ao teste de ELISA sanduíche indireto com anticorpo monoclonal contra a proteína da capa protéica do CTV. Os resultados indicaram variação na resistência à translocação do vírus nas diferentes construções transgênicas utilizadas e entre clones de uma mesma planta. Todas as linhagens transgênicas inoculadas indicaram a presença do vírus em pelo menos uma das três repetições avaliadas, quando inoculadas por enxertia. Quando inoculadas pelo vetor algumas plantas apresentaram todos os seus clones com baixos valores de absorbância, indicando uma possível resistência ao patógeno.
Titre en anglais
Molecular characterization and resistance evaluation to citrus tristeza virus (CTV) in transgenic plants of Valência orange (Citrus sinensis L. Osbeck)
Mots-clés en anglais
Citric fruits
Citrus tristeza.
ELISA
Plant genetic resistance
Plant molecular genetics
Transgenic plants
Resumé en anglais
In Brazil, citrus is one of the most important cultures. The productivity of this culture in the country is still considered low and this fact is due to several pests and diseases that affect the crop. Among the diseases there is the tristeza, caused by Citrus tristeza virus (CTV). This pathogen can also be related with another important disease, the citrus sudden death. Therefore, CTV acquired much more significance. This work aimed to characterize with molecular analysis and to evaluate the resistance to CTV of transgenic Valência plants (Citrus sinensis L. Osbeck), containing genomic fragments of CTV, in three different transgenic constructs. The plants were confirmed as transgenic by Southern blot. The transcription of the transgene was evaluated by RT-PCR. The transgenic plants were challenged with a weak strain of CTV, CTV-IAC, by bud inoculation with two infected bubbles, and by the infected vector Toxoptera citricida. After four weeks of inoculation, the evaluation of viral replication in the transgenic seious was done by ELISA indirect sandwich with monoclonal antibody against the CTV coat protein. The results indicated variation of the resistance to the translocation of the virus between the different transgenic constructs used and between clones of the same plant. All the inoculated plants indicated the presence of the virus in, at least, one of the three evaluated clones, when inoculated by grafting. When inoculated by the vector some plants had all their clones with low values of virus, indicating a possible resistance to the pathogen.
 
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Fabiana_Muniz.pdf (16.77 Mbytes)
Date de Publication
2009-03-05
 
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  • MUNIZ, Fabiana. Genetic transformation of Citrus sinensis with Citrus tristeza virus (CTV) derived sequences and reaction of transgenic lines to CTV infection. Biologia Plantarum, 2012, vol. 56, n. 1, p. 162-166.
  • TAVANO, Eveline Carla da Rocha, et al. In vitro organogenesis of Citrus volkameriana and Citrus aurantium [doi:10.1007/s10535-009-0075-2]. Biologia Plantarum [online], 2009, vol. 53, p. 395-399.
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