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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.2019.tde-20191218-143425
Document
Auteur
Nom complet
Maria Helena Santini Campos
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Piracicaba, 1992
Directeur
Titre en portugais
Produção de dextranas e aspectos da biologia molecular de Leuconostoc mesenteroides
Mots-clés en portugais
BACTÉRIAS LÁTICAS
BIOLOGIA MOLECULAR
DEXTRANA
FERMENTAÇÃO AERÓBICA
LINHAGENS
Resumé en portugais
A tecnologia da produção de dextrana desenvolveu-se com uma única linhagem de Leuconostoc mesenteroides (B-512f). dando-se ênfase aos estudos de propriedades fisico-quimicas do produto e à atividade da dextrana-sacarase. No presente trabalho estudaram-se aspectos da biologia molecular da espécie, seleção de linhagens, avaliação da produção de dextrana de parâmetros da fermentação aeróbia. Foi possível desenvolver metodologias para extração de DNA genômica e plasmidial investigar quanto a métodos de transferência de material genético, identificar e mapear plasmídios, bem como caracterizar linhagens de interesse quanto a marcas de resistência a antibióticos. As linhagens MH4.1, MH8.1, MH8.2, L2 e Z2, foram identificadas como linhagens produtoras de dextrana através de meio seletivo desenvolvido para esta finalidade. Através de processo de fermentação com recirculação do meio liquido, para seu arejamento continuo, em protótipo de fermentador, conseguiu-se otimizar a produção nesta escala, superando-se valores registrados na literatura como elevados. A eficiência de extração e purificação de DNA obtidas neste trabalho, bem como do meio de crescimento especial, possibilitam obter preparações de DNA genômico ou plasmidial em quantidades adequadas a estudos moleculares, clonagem e transformação de L. mesenteroides, efetuar transferência de genes para outras espécies, bem como isolar destas, genes para a transformação de L. mesenteroides. A linhagem MH4.1 possui dois plasmídios de tamanhos 52 kb e 2,1kb. O plasmídio 52 kb foi mapeado e nele identificado o gene de resistência a tetraciclina. Fragmentos deste plasmídio foram circularizados e engenheirados para a construção de um vetor plasmidial bifuncional com características apropriadas à transformação, incluindo-se marca seletiva e origem de replicação L. mesenteroides e E. Coli
Titre en anglais
Dextran productivity and molecular biology aspects of Leuconostoc mesenteroids
Resumé en anglais
Dextran production technology has been developed based in a single strain of Leuconostoc mesenteroides (B-512F). Physical and chemical properties of the product and dextran-sucrase activity were the main subject of studies. ln the present work it was studied aspects of the biology of the species, strain selection, evaluation of dextran production and aerobic fermentation parameters. lt was possible to develop metodologies for genomic and plasmid DNA extraction and to test methods for the transfer of genetic material, to identify and map plasmids and to characterize drug resistance in selected strains. The strains MH4.1, MH8.1, MH8.2, L2, and 8 were found as high producers of dextran throughout selection in a selective medium developed with this aim. ln a fermenter prototype a process was conducted with recycle of the liquid mass for continuous aeration and production was optimized reaching values above those found in the literature. The eficiency of DNA extraction and purification obtained in this work and the special growth medium have provided adequate amount of DNA for molecular studies, cloning and transformation. Transformation was proved to be viable, and to transfer genes to other bacteria and to recover genes from them and re-transform L. mesenteroides. The strain MH4.1 has two plasmids of 52 Kb and 2,1 Kb. The 52 Kb plasmid was mapped and the tetracyclin resistance gene identified on it. Fragments from this plasmid were circularized and engineered for construction of a bifunctional vector adequate for transformation, bearing a selective marker and origin of replication for L. mesenteroides and E. coli.
 
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Date de Publication
2019-12-19
 
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