O melhoramento de citros através de métodos convencionais tem sérias limitações devido à existência dos embriões nucelares nas sementes das espécies poliembriônicas, ao alto grau de heterozigose e ao longo ciclo reprodutivo, entre outros fatores. A cultura de tecidos surgiu cama uma técnica auxiliar no melhoramento das espécies cítricas visando transpor as dificuldades encontradas na aplicação das métodos convencionais. Esta técnica também tem sido empregada em trabalhas com indução de mutações, visando a obtenção de mutantes sólidos quando se utilizam agentes mutagênicos para aumentar a frequência das mutações. O presente trabalho teve como objetivo adaptar diferentes metodologias de cultura de tecidos no cv. Pera (Citrus sinensis Osbeck. ),visando futuros trabalhas com indução de mutações. Nucelos foram extraídos de sementes de frutos imaturos, 12 semanas após a antese. Embriões somáticos foram produzidos diretamente a partir destes explantes em meio MT, com diferentes concentrações de IAA e CIN. o meio suplementado com 1,0 mg/l de CIN favoreceu a formação de embrióides, principalmente através da formação de embrióides a partir dos já existentes. Calos embriogênicos foram produzidos diretamente a partir dos nucelos em meio MT suplementado com BAP (10 mg/l). Um grande número de embri6ides foi obtido a partir dos calos, sendo que o meio MT suplementado com 50 g/l de lactose e 500 mg/l de extrato de malte foi o mais eficiente. Os embrióides produzidos a partir dos nucelos ou a partir de calos nucelares foram capazes de se desenvolver e regenerar plantas, em meio MT contendo 50 g/l de sacarose e 500 mg/l de extrato de malte. Protoplastos foram isolados a partir dos calos embriogênicos e sua viabilidade foi verificada pelo teste com diacetato de fluoresceína. O rendimento no isolamento foi de 1,03x10 protoplastos por grama de calo e a viabilidade de 84% foi verificada logo após o processo de purificação dos mesmos. Brotações adventícias foram induzidas a partir dos cotilédones extraídos de embriões nucelares. As brotações foram obtidas em meio MT contendo diferentes concentrações de NAA e BAP e suas combinações. Entretanto, o meio contendo 0,5 mg/l de BAP e 1,0 mg/l de NAA foi o que apresentou maior número de brotaç5es por explante responsivo. Ensaios de doses de radiação gama foram conduzidos nos diferentes materiais: nucelos, calos nucelares, cotilédones de embriões nucelares e protoplastos, visando a determinação de doses recomendáveis para futuros trabalhos utilizando estes explantes na indução de mutações.

Citrus improvement via conventional methods has encountered serious limitations due to the existence of nucellar embryos in the seeds of polyembryonic species, as well as to the high degree of heterozygosity and the long reproductive cycle, among other factors. Tissue culture has emerged as an auxiliary technique for improving citrus species in order to surpass the difficulties found in applying the conventional methods. This technique has also been used in studies involving mutation induction to obtain solid mutants when mutagenic agents are used to increase mutations frequency. The objective of the present work was to adapt different tissue culture methodologies in cv. Pera (Citrus sinensis Osbeck) to future mutation breeding of Citrus species. Nucelli were extracted from seeds of immature fruit, 12 weeks after anthesis. Somatic embryos were produced directly from these explants in the MT medium with different concentrations of IAA and CIN. The medium supplemented with 1.,0 mg/l of CIN favored the formation of embryos, mainly via budding process. Embryogenic calluses were produced directly from the nucelli in the MT medium supplemented with BAP (10 mg/l). A high number of embryos was obtained from the calluses, where the MT medium supplemented with 50 g/l of lactose and 500 mg/l of malt extract proved to be the most efficient. The embryos produced from nucelli or from nucellar calluses were able to develop and to regenerate plants in the MT medium containing 50 g/l sucrose and 500 mg/l malt extract. Protoplasts were isolated from the embryogenic calluses and their viability was verified by the test with fluorescein diacetate. The yield provided in the isolation was 1.03 x 10⁶ protoplasts per 1 gram of callus and the viability of 84% was verified soon after the protoplasts purification process. Adventitious buds were induced from the cotyledons extracted from nucellar embryos. Buds were obtained in the MT medium containing different concentrations of NAA and BAP and their combinations, however the medium containing 0.5 mg/l BAP and 1.0 mg/l NAA provided the highest number of buds per responsive explant. Gamma irradiation was conducted to the different materiaIs: nucelli, nucellar calluses, cotyledons of nucellar embryos and protoplasts, with the aim of determining the dosages to be recommended in future studies utilizing these explants in mutation induction.