O presente trabalho avaliou a associação entre a comunidade endofítica de Citrus sinensis (Laranja Natal) e a presença de plantas resistentes à Clorose Variegada dos Citros (CVC). A densidade populacional e a biodiversidade de bactéria endofíticas cultiváveis ou não foi avaliada de ramos descascados de 4 tipos de plantas de citros (plantas sadias, escape e doentes de laranja natal e plantas de Tangerina poncã (C.reticulata). Além disso, foi estudada utilizando DGGE a colonização de plântulas de C. limonia por 3 espécies endofíticas de C. sinensis. Esta estratégia foi desenvolvida em batata (Solanun tuberosum como planta modelo. Não foi observada diferença significativa entre a densidade bacteriana em plantas de laranja. Entretanto, foi observado que a bactéria endofítica Curtobacterium flaccumfaciens foi isolada principalmente de plantas escape, enquanto que Methylobacterium. spp. foi isolada principalmente de plantas doentes. Utilizando a técnica de DGGE (Gel de Eletroforese em Gradiente Desnaturante) foi observada a presença de uma banda rica em GC de uma β-proteobactéria não cultivável somente em plantas escapes. Também foi observada maior diversidade genotípica, baseada no gene de rDNA 16S, na população de Methylobacterium spp isolada de plantas doentes. De acordo com estes resultados, foi sugerido que a presença de C. flaccumfaciens e/ou a β-proteobacteria não-cultivável poderia ativar uma reação sistêmica induzida nas plantas escape, e esta resistência ou uma possível antibiose inibiria a colonização desta planta por vários genótipos de Methylobacterium spp. e manteria os níveis populacionais de Xylella fastidiosa (agente causal da CVC) abaixo daqueles que causam o aparecimento de sintomas CVC. Após inoculação na semente, o isolado AR1.6/2 de M. extorquens foi observado principalmente nas câmaras sub-estomáticas de caule e em tecidos sub-epidérmicos de plântulas de C. limonia, as quais exibiram uma redução no acúmulo de biomassa em comparação com plantas controle. O isolado ER1/6 de C. flaccumfaciens induziu um acúmulo de biomassa em plântulas inoculadas. O isolado ER1/6 e M. mesophilicum (isolado SR1.6/6) foram consistentemente observados no parênquima adjacente aos vasos infectados e também nas câmaras sub-estomáticas dos caules. Os resultados apresentados neste trabalho mostram, pela primeira vez evidências da indução de resistência em C. sinensis por bactérias endofíticas, e indicam uma estratégia importante para o entendimento da clorose variega dos citros, além da possibilidade do seu controle biológico por meio destas bactérias.

The present work was carried out to evaluate whether the bacterial endophyte communities contributes to Citrus Variegated Chlorosis (CVC) resistance in sweet orange (Citrus sinensis. The population density and biodiversity of culturable and unculturable endophytic bacteria was examined from peeled branches of 4 types of citrus (healthy, escape and diseased plants of sweet orange and tangerine - C. reticulate). In addition, the interaction between endophytic bacteria and seedlings of C. limonia was studied using molecular strategy developed in a model plant (Solanun tuberosum). There were no significant differences for population density of bacteria among sweet orange plants. However, the endophytic bacteria Curtobacterium flaccumfaciens was detected mainly in escape plants, while Methylobacterium spp. was detected in diseased plants. Using the DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis) technique, the presence of a consistent high-GC band of unculturable β-proteobacteria was detected only in escape plants. In addition, more diversity of 16S rDNA genotypes of Methylobacterium spp. was detected in diseased plants. These results suggest the hypothesis that the presence of C. flaccumfaciens and the unculturable β-proteobacteria could elicit a induced systemic resistance in escape plants, which or a possible antibiosis could inhibit the colonization of this plant by many Methylobacterium spp. genotypes and keep the Xylella fastidiosa (causal agent of CVC) population in a low level avoiding of development CVC diseased. After seed treatment with AR1.6/2 strain of M. extorquens, the endophytic bacteria were observed mainly in sub-epidemic tissues of C. limonia, which plants shown a reduced growing in comparison of plants. The endophytic C. flaccumfaciens strain ER1/6 shown a plant-promoting effect in C. limona seedlings. This ER1/6 strain and M. mesophilicum (strain SR1.6/6) were abundant in the parenchyma adjacent to infected vessels, and also filled sub stomatal chambers of stems. Results of the present study provide then first evidence of induced systemic resistance by endophytic bacteria in C. sinensis and a promising approach to understand the CVC disease, and its biological control.