O presente trabalho teve por objetivo desenvolver a tecnologia de fusão de protoplastos em Humicola sp com a finalidade do seu estudo genético, visando incrementar a sua produção de celulases e estabelecer um programa de melhoramento genético para este fungo. Nesse plano foram estudadas entre outras, a otimização da regeneração de protoplastos, a sobrevivência a luz ultravioleta, a obtenção de mutantes e a seleção de variantes de maior produção de enzimas celulolíticas. Dado que o Humicola sp apresenta conídios multinucleados, a obtenção de mutantes foi realizada por irradiação de protoplastos com luz ultravioleta. Do estudo de obtenção de protoplastos, tempo de tratamento enzimático do micélio e número de núcleos presentes por protoplasto, foi observado que com tratamentos por períodos curtos de tempo (30 minutos) obtinha-se a maior porcentagem de protoplastos uninucleados, condição favorável para a obtenção de mutantes. Para a seleção de variantes de maior produção de enzimas foi necessário o desenvolvimento de uma técnica simples, específica para a linhagem de Humicola estudada, que permitisse de forma fácil e rápida quantificar a produção de celulases. A produção de celulases, das variantes selecionadas, foi quantificada pela determinação da celulase total (FPA). Finalmente foram estudadas as condições de fusão de protoplastos, na linhagem utilizada, por tratamento com polietilenoglicol e pela técnica de eletrofusão.

The present work attempts to develop the protoplast fusion technique in Humicola sp to study it genetically, in order to increment cellulases production and to establish a genetic improvement program for this fungus. Among others the optimization of protoplasts regeneration, their survival to UV irradiation, mutant induction and hyper-cellulolytic variants selection were studied within this program. By the fact that Humicola sp presents multinucleated conidia, mutant induction was done by protoplasts UV irradiation. From the protoplast formation study, enzymatic mycelium treatment time and protoplast nuclei number, was observed that with mycelium treatments by short periods of time (30 minutes) the highest percentage of uninucleated protoplasts were obtained, a wished condition for mutants induction. For Hyper-cellulolytic variants selection was necessary to develop a simple technique, specific for the Humicola sp studied strain, that allows in an easy and rapid manner to quantify the cellulase production. The selected variants cellulase production, was quantified by the measurement of the total cellulase (FPA). Finally the protoplast fusion conditions, in the strain used, were studied by polyethyleneglycol treatment and by electrofusion.