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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.1983.tde-20220208-034042
Documento
Autor
Nome completo
Wanderley Dias da Silveira
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Piracicaba, 1982
Orientador
Título em português
Obtenção e fusão de protoplastos em Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin
Palavras-chave em português
FUNGOS ENTOMOPATOGÊNICOS
FUSÃO DE PROTOPLASTOS
Resumo em português
O presente trabalho foi conduzido com a finalidade de se estudar a possibilidade de obtenção do ciclo parassexual no fungo Metarhizium anisopliae, dentro e entre duas linhagens designadas E6 e RJ-3 que se diferenciam em várias características genéticas seja através de metodologia clássica ou através da fusão de protoplastos. Para isso, obtiveram-se mutantes morfológicos e auxotróficos induzidos por luz ultravioleta. Desenvolveu-se também uma técnica de enriquecimento por filtração para obtenção de mutantes auxotróficos, conseguindo-se um máximo de 6,13% de mutantes após crescimento em meio líquido por períodos intercalados de 20-24 horas e subseqüente filtração em cinco camadas de gaze esterilizada. O aumento de mutantes obtidos em relação ao processo de isolamento total foi de 613 X prevalecendo a obtenção de mutantes auxotróficos para aminoácidos e ácido nucleico sobre os deficientes para vitaminas. Produção de heterocário foi obtida entre mutantes auxotróficos complementares da linhagem E6, porém, não se logrou chegar ao estado diplóide. Com relação a heterocários entre mutantes auxotróficos das linhagens E6 e RJ-3, com raras exceções, estes não foram obtidos. Os heterocários que se desenvolveram entre estas linhagens produziram setores que, através da medida da quantidade de DNA por conídio e padrão eletroforético de esterases, mostraram-se ser diplóides e hiper-haplóides. A produção média de protoplastos em cada linhagem foi de 0,9 x 107/ml para a linhagem E6 e 1,33 x 107/ml para a linhagem RJ-3 após 2 horas e meia a 3 horas de tratamento frente ao complexo lítico. A técnica de fusão de protoplastos entre os mutantes auxotróficos e morfológicos envolvidos, ocorre com uma alta freqüência (0,83 . 10-5-44,1 . 10-5) e demonstrou que o estado heterocariótico é obtido, tanto nos cruzamentos dentro de linhagens como entre linhagens, ocorrendo recombinação e segregação, sem a obtenção do estado diplóide. Desse modo, a técnica de fusão de protoplastos constitui uma maneira viável para a obtenção de recombinação e variabilidade entre linhagens de M. anisopliae que sejam incapazes de apresentarem recombinação via metodologia clássica de ciclo parassexual, bem como abre a possibilidade de futuros estudos genéticos na referida espécie.
Título em inglês
Obtainment and fusion of protoplasts in Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin
Resumo em inglês
The present work was carried out aiming the study of parasexuality in the fungus Metarhizium anisopliae using two differents strains designed E6 and RJ-3 which have several distinct genetic characteristics. This was done by the classical processes and protoplast fusion. For this morphological and auxotrophic mutants were obtained after ultra-violet induction. Also a technique of enrichment by filtration was developed for auxotrophic mutants derivation. A maximum total of 6.13% mutants after growth by intercalated periods of 20-24 hours in liquid medium and filtration. An increase of 613 X in relation of the total isolation method was obtained in this way most in relation to mutants which required amino acids. Heterokaryon were produced between complementing auxotrophic and morphological mutants from strain E6 but diploids were not produced. ln relation to heterokaryon and auxotrophic mutants from E6 x RJ-3, with rare exceptions heterokaryon were not produced. However, the rare heterokaryon produced sectors which were diploids and hyper haploids after being tested by their DNA content and electrophoresis. Protoplast production was 0.9 x 107/ml for strain E6 and 1.33 x 107/ml for strain RJ-3 after 2.1/2 to 3 hours treatment by a lytic complex. The fusion protoplast technique has shown that heterokaryon were obtained in all crosses, with the occurrence of recombination and segregation without the diploid state. The protoplast fusion technique is in this way appropriated for the derivation of recombinants and to increase variability among strains of M. anisopliae.
 
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Data de Publicação
2022-02-08
 
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