Tesis Doctoral
DOI
https://doi.org/10.11606/T.11.1980.tde-20231122-092701
Documento
Autor
Nombre completo
Tadeu Elisbão
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
Piracicaba, 1980
Director
Título en portugués
Mutagenicidade no locus responsável pela resistência ao fungicida cloroneb em Aspergillus nidulans
Palabras clave en portugués
FUNGOS
MUTAGENICIDADE
RESISTÊNCIA AO FUNGICIDA
Resumen en portugués
Esta investigação foi levada a efeito com o objetivo de estudar geneticamente o fenômeno da resistência ao fungicida cloroneb (1,4-dicloro-2,5-dimetoxibenzeno) em Aspergillus nidulans. Através de mutações espontâneas foram obtidos 6 mutantes resistentes ao cloroneb, a partir de linhagens sensÃveis. Esses mutantes foram caracterizados quanto à capacidade de crescimento em doses crescentes do fungicida verificando-se que todos eram semidependentes de cloroneb, requerendo à presença da droga no meio de cultura para que suas colônias alcançassem o desenvolvimento máximo. Diplóides construÃdos entre linhagens resistentes e sensÃveis mostraram que a mutação para a resistência foi recessiva em uma linhagem, semidominante em outra e dominante em 4 outras. Em 3 destas últimas linhagens encontrou-se indÃcios de sobredominância. Submetidos à análise genética, todos os 6 mutantes revelaram que a resistência era devida a um único gene. Em cada um dos mutantes a análise mitótica atribuiu ao grupo de ligação III o loco responsável pela resistência e a análise meiótica permitiu mapear esse loco a uma distância média de 34 unidades de mapa do marcador galA1. Ensaios de alelismo comprovaram que todas as 6 mutações pertenciam ao mesmo loco. Procurando-se obter mutantes sensÃveis a partir de duas linhagens resistentes ao cloroneb (CHL-1 e CHL-13) apurou uma linhagem realmente sensÃvel e outras 3 que continuavam resistentes mas tinham sofrido alterações nos graus de resistência e ou semidependência. Duas linhagens sensÃveis e duas resistentes foram submetidas a 4 diferentes tratamentos mutagênicos: ácido nitroso, metano - sulfonato de etila, dietilsulfato e 8 - metoxipsoraleÃna associada à luz ultravioleta longa. Foram traçadas curvas de sobrevivência para cada linhagem em cada tratamento e, com base em tais curvas, estimou-se as doses apropriadas para futuros procedimentos. Procurou-se induzir mutantes resistentes a partir das linhagens sensÃveis e vice-versa. Através das frequências de setores mutantes emitidos por colônias monospóricas, advindas de conÃdios submetidos aos tratamentos, não se detectou efeito residual de nenhum dos mutagênicos. Uma das linhagens sensÃveis (proA1; pabaA6; yA2) revelou-se adequada para se quantificar os efeitos dos tratamentos mutagênicos sobre a indução de resistência ao cloroneb já que os mutantes, em meio de cultura adequado, produzem conÃdios que constrastam francamente com os da linhagem sensÃvel original. Foi sugerido um sistema para a averiguação da capacidade mutagênica de substância suspeitas baseado na indução de resistência ao cloroneb em A. nidulans.
Título en inglés
Not avaliable
Resumen en inglés
The present research was carried out aiming the genetic study of resistance to the fungicide chloroneb ( 1,4 - dichloro - 2, 5 - dimethoxybenzene) in Aspergillus nidulans. Six chloroneb-resistant mutants, spontaneously obtained from non-resistant strains, were characterized in to growth ability in increasing fungicide concentrations. It was shown that all were partially-dependent to cloroneb, requiring the drug for maximum growth. Diploids constructed between resistant and non-resistant strains have shown that the mutation for resistance was recessive in one strain, semidominant in another one and dominant in the remaining four strains. In three of these latter strains it was found signals of overdominance. Genetic analysis have shown that in six mutants resistance was due to a single gene mutation. Mitotic analysis carried out in all mutant strains indicated that the locus responsible for resistance was located in linkage group III and meiotic analysis have shown that this locus is located about 34 units from the galA1 gene. Allelic tests indicated that all six mutants belonged to the same locus. In order to obtain non-resistant from two chloroneb-resistant strains (CHL-1 and CHL-13) it was found one strain non-resistant and other three which were still resistant but which have suffered several alterations in the degrees of resistance and/or semidependence. Two non - resistant and two resistant strains were submited to four different mutagenic treatments: nitrous acid, ethylmenthanesulphonate, diethylsulphate and 8 - methoxypsoralen associated with near ultraviolet light. Survival curves were obtained for each strain and treatment and it was then possible to estimate the appropriate doses for further treatments. It was tried the induction of resistant mutants from non - resistant strains and vice-versa. From the frequencies of mutant sectors emerging from monosporic colonies, originated from conidia which were submitted to the mutagenic treatments it was not detected residual effect of any of the mutagens. One non - resistant strain (proaA1; pabaA6; yA2) was shown to be the most appropriate in order to quantify the effects of the mutagenic treatments in relation to induction of chloroneb resistance since the mutants in appropriate culture medium can produce conidia which are easily distinguished from the original non - resistant strain. It was suggested a system for the screening of the mutagenic ability of “suspected” substances based on the induction to chloroneb resistance in A. nidulans.
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Fecha de Publicación
2023-11-24