Este trabalho teve como objetivo principal a produção de plantas híbridas somáticas entre duas espécies do gênero Citrus, o limão ‘Cravo’ (Citrus limonia Osbeck) e a tangerina ‘Cleópatra’ (Citrus reshni Hort.), como apoio ao melhoramento de porta-enxertos. O limão ‘Cravo’ se constitui atualmente no principal porta-enxerto comercial utilizado no Brasil, devido as suas boas qualidades agronômicas. Entretanto, esta espécie é suscetível ao declínio dos citros, uma “doença” que é responsável pela morte e/ou eliminação de milhares de árvores cítricas por ano, no Brasil. A tangerina ‘Cleóprata’ é uma espécie bastante utilizada como porta-enxerto em outros países e que tem sido descrita na literatura como tolerante ao declínio. Os impedimentos ligados à biologia reprodutiva das espécies do gênero Citrus dificultam ou, as vezes, até impedem o melhoramento mediante cruzamentos controlados. A hibridação somática em citros, por meio de fusão de protoplastos, tem possibilitado a produção de plantas híbridas tetraplóides, combinando características desejáveis de duas espécies. Este trabalho descreve o desenvolvimento de uma metodologia de isolamento e cultivo de protoplastos embriogênicos de suspensão celular das duas espécies, resultando na obtenção de plantas aparentemente idênticas às espécies parentais. A aclimatação das plantas ao meio ambiente foi considerada como a fase mais crítica do processo. Uma metodologia de isolamento de protoplastos de mesofilo das duas espécies também foi ajustada. Nas densidades de cultivo de 1 e 2 x 10⁵ protoplastos.ml^-1 de suspensão celular de limão ‘Cravo’ e tangerina ‘Cleóprata’, observou-se a eficiência máxima de plaqueamento (5 a 15%). A porcentagem de obtenção de células heterocariontes (híbridas), logo após a adição de PEG foi de 5,0 a 6,9 %. Dois métodos de fusão, com uso de PEG, foram testados e não apresentaram diferença significativa em termos de formação de células heterocariontes. Experimentos de fusão, com uso do polietileno glicol, foram realizados envolvendo protoplastos de suspensão celular e de mesofilo das duas espécies. Destes experimentos foram obtidas mais de 500 plantas. A seleção e a confirmação dos híbridos somáticos tetraplóides nestas plantas foram realizadas por meio de marcadores moleculares RAPD e marcadores isoenzimáticos. Como resultado, 11 plantas foram confirmadas como sendo híbridos somáticos.

The aim of this research was to obtain somatic hybrids between two species of the genus Citrus ‘Rangpur’ lime (Citrus limonia Osbeck) and ‘Cleópatra’ mandarin (Citrus reshni Hort.) ‘Rangpur’ lime is the most important Brazilian citrus rootstock due to its higher horticultural performance. Nevertheless, this species is susceptible to citrus “declínio” disease, a disease that is responsible for the death of millions of productive trees per year in Brazil. ‘Cleopatra’ mandarin has become an increasingly important rootstock in other countries and has been reported as being tolerant to citrus “declínio”. The limited impact of breeding on citrus cultivar improvement is due to the particularities of the reproductive biology of citrus species. Plant somatic hybridization through protoplast fusion has been used to produce allotetraploid hybrids. It is an additive process that combines desirable characteristics of both parents. This research describes the methodology of the isolation and culture of embryogenics protoplasts from ‘Cleopatra’ mandarin and “Rangpur’ lime, and as result, parental-like plants were recovered. The methods tested for rooted plant acclimation showed low efficiency. A methodology of leaf protoplast isolation for both species was also adjusted. The maximum plating efficiency (5-15 %) was obtained at a density of 1-2 x 10⁵ protoplasts.ml^-1. Leaf protoplasts and protoplasts from embryogenic cell suspension were fused by two PEG methods. The frequency of heterokaryon formation was about 5 - 6.9 % and there was no difference between the fusion methods tested. Plants were recovered following protoplast fusion of two treatments (‘Cleopatra’ as the protoplast from embryogenic suspensions and ‘Rangpur’ as the leaf protoplast and the reciprocal cross). Among them, eleven plants were confirmed to be an allotetraploid somatic hybrid by molecular markers (RAPD), isoenzymes markers and cytological analysis.