Mapas de ligação foram construídos para indivíduos de Citrus sunki Hort. ex. Tan. e Poncirus trifoliataL.) Raf. cv. Rubidoux explorando a estratégia de mapeamento “pseudo-testcross” com marcadores RAPD. A partir de cruzamentos controlados realizados em 1993 foram obtidos 314 indivíduos F1. Dois conjuntos de dados foram obtidos, um para cada progenitor. As análises de ligação foram realizadas utilizando o programa MAPMAKER para Macintosh versão 2.0 a um LOD > 4,0 e uma frequência máxima de recombinação (θ) = 0,30. Um total de 208 “primers” decâmeros de sequência arbitrária foram utilizados para selecionar aqueles que mostravam polimorfismo na progênie. A configuração “pseudo-testcross” foi detectada por 78 “primers” onde o marcador estava presente em um parental, ausente em outro e segregava na F1. Os 78 "primers" selecionados foram utilizados para análise RAPD em 80 indivíduos da progênie F1 produzindo um total de 168 marcadores. A análise de ligação dos Iocos revelou que 123 marcadores foram mapeados em 18 grupos de ligação (10 grupos de ‘Sunki’ e 8 grupos de ‘Rubidoux’) enquanto que 45 marcadores não se ligaram a qualquer grupo. O comprimento total dos mapas foi de 732,32 cM para ‘Sunki’ e 867,58 cM para ‘Rubidoux’ com a distância entre marcadores variando de 0 a 43,8 cM (Kosambi). Marcadores moleculares ligados ao gene de imunidade ao vírus da tristeza dos citros foram mapeados no grupo de ligação l de Poncirus trifoliata (L.) Raf. cv. Rubidoux. O marcador encontrado mais próximo ao Ctv foi o OPAV12_ 470 localizado a 17,8 cM do gene. Cem híbridos obtidos no cruzamento entre Citrus sunki Hort. ex. Tan. e Poncirus trifoliata (L.) Raf. Rubidoux foram também avaliados quanto sua capacidade de multiplicação in vitro e enraizamento de estacas, visando futuros trabalhos de seleção à gomose de Phytophthora. Os marcadores RAPD foram utilizados também para a identificação de plântulas nucelares e zigóticas dos cruzamentos: laranja ‘Caipira’ (Citrus sinensis L. Osbeck) x laranja ‘Azeda’ (Citrus aurantium L.) e laranja ‘Caipira’ (Citrus sinensis L. Osbeck) x limão ‘Cravo’ (Citrus limonia Osbeck), sendo que foram obtidos 17 (6%) e 8 (9,6%) híbridos em cada cruzamento, respectivamente.

Genetic linkage maps for Citrus sunki Hort. ex. Tan. and Poncirus trifoliata (L.) Raf. cv. Rubidoux have been developed exploiting the pseudo-testcross mapping strategy using RAPD markers. From controlled crosses 314 F1 zygotic progeny individuals were obtained. Two separate data sets were generated, one for each parent. Preliminary linkage analysis was carried out using MAPMAKER V2.0 for Mac under a phase-unknown backcross model at a LOD > 4.0 and max. θ = 0.30. A total of 208 arbitrary 10-mer primers were screened for segregating RAPD markers. Pseudo-testcross mating configurations were displayed by 78 primers where the marker was present in one parent, absent in the other and segregating in the progeny. These 78 primers were run on 80 progeny amplifying a total of 168 RAPD markers. Linkage analysis revealed that 123 of these RAPD loci fell into 18 linkage groups (10 groups for ‘Sunki’ e 8 groups for ‘Rubidoux’) while 45 loci remained unassigned to any linkage group. The total length of the maps was 732.32 cM for ‘Sunki’ and 867.58 cM for ‘Rubidoux’ with the distance between markers ranging from 0 to 43.8 cM. A QTL for citrus tristeza virus immunity in Poncirus trifoliata was mapped. The Ctv gene region was found to be located on linkage group I of Poncirus trifoliata (L.) Raf. cv. Rubidoux. The closest molecular marker to the CTV immunity locus was OPAV12_470 at 17.8 cM. One hundred hybrids obtained from the cross between Citrus sunki Hort. ex. Tan. and Poncirus trifoliata (L.) Raf. cv. Rubidoux were multiplied using micropropagation and rooting of stem cuttings. RAPD markers were also used to identify nucellar and zygotic seedlings in crosses of sweet orange ‘Caipira’ (Citrus sinensis L. Osbeck) x sour orange (Citrus aurantium L.) and sweet orange ‘Caipira’ (Citrus sinensis L. Osbeck) x ‘Rangpur lime’ (Citrus limonia Osbeck. ln each cross, 17 (6%) and 8 (9.6%) hybrids were obtained, respectively.