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Mémoire de Maîtrise
DOI
https://doi.org/10.11606/D.11.2001.tde-20210919-105753
Document
Auteur
Nom complet
Elaine Patricia Maltez de Souza
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Piracicaba, 2001
Directeur
Titre en portugais
Efeito do hormônio do crescimento no sistema lipolítico de bovinos: avaliação da atividade da lipase sensível a hormônio e da concentração de RNAm da lipase e da proteína G inibitória
Mots-clés en portugais
HORMÔNIO DO CRESCIMENTO
LIPÓLISE
VACAS
Resumé en portugais
Diversos sinais atingem as células eucarióticas sendo que alguns necessitam de receptores na membrana para transmitir seus efeitos no interior da célula. As proteínas G atuam em conjunto com os receptores de membrana, regulando, entre outros processos, a atividade da adenilato ciclase e, portanto, os níveis intracelulares de AMP cíclico (AMPc). O aumento do nível de AMPc ativa a proteína quinase A, responsável pela ativação da lipase sensível a hormônio (HSL) através de fosforilação desta enzima em resíduos de serina. Esta sequência de eventos para ativação da HSL tem papel essencial na regulação da mobilização de ácidos graxos, por regular a atividade catalítica considerada limitante à hidrólise dos triacilgliceróis (TAG) nos adipócitos. O mecanismo através do qual a somatotropina (ST) ou hormônio do crescimento (GH) ativa a lipólise e aumenta a resposta a agonistas beta-adrenérgicos, ainda não está completamente elucidado, mas resultados com cultura de tecidos, demonstraram que a ST estimula a lipólise através da via de ativação do AMPc, resultando em maior atividade da HSL, principalmente pela remoção da inibição exercida pela proteína G inibitória à adenilato ciclase, através de sua subunidade alfa 2. Este estudo teve como objetivo principal, verificar o efeito da ST na expressão gênica da HSL e da proteína Giα2, em cultura de tecido adiposo. Seis vacas serviram como fonte de tecido adiposo para as culturas de tecido obtido por biópsia que foram avaliadas para a concentração de RNAm (RNA mensageiro) das proteínas estudadas e a atividade da HSL. Explantes de 30 mg foram incubados durante 48 horas em meio 199 com 25 mM de bicarbonato e HEPES (pH 7,4, 37°C) e 5% CO2 nos seguintes tratamentos: 1) Controle: insulina (100 ng/ml) e dexametasona (10 nM) e 2) Tratamento com bST: insulina (100 ng/ml), dexametasona (10 nM) e bST (100 ng/ml, ST recombinante bovino - Monsanto). A lipólise foi determinada pela liberação de NEFA no meio de cultura 199 e o RNA total foi extraído dos explantes para quantificação do RNAm da HSL e proteína Giα2. As análises estatísticas foram realizadas usando o teste t de Student para amostras pareadas (com ou sem ST) através do programa SAS. Houve um aumento da liberação de NEFA dos homogenatos feitos a partir de tecidos tratados com ST (19,97 e 25,37 nMol/mg proteína.h para os tratamentos controle e com ST, respectivamente; p<0,05; n=5; desvio padrão 1,36). Não houve diferença significativa (p>0,05) na abundância do RNAm da Giα2 (0,46 e 0,55 x 10-3 fmol para os tratamentos controle e com ST, respectivamente; n=5; desvio padrão 0,25). Embora não tenha sido observado efeito na abundância de RNAm da proteína Gi, a ST alterou a abundância de RNAm da HSL (p<0,06; 0,08 e 0,13 x 10-5 fmol para os tratamentos controle e com ST respectivamente; n=5; desvio padrão 0,03). Os resultados obtidos confirmam a hipótese de que a quantidade da proteína Gi não é alterada, apesar de sugerirem que existe um aumento na abundância de RNAm da HSL, que pode ser responsável por parte do aumento da atividade lipolítica após tratamento com ST.
Titre en anglais
Effect of growth hormone on lipolytic system of bovines: activity avaliation of hormone sensitive lipase and mRNA abundance of lipase and inhibitory G protein
Resumé en anglais
Many signals reach the eukaryotic cells and some need surface receptors to transfer its message to the interior of the cell. The G-proteins work with membranes receptors, controlling adenylate cyclase activity, and thus cAMP levels. The increase of intracellular levels of cAMP activates protein kinase A, which in turn phosphorylates hormone-sensitive in serine residues. These events play an essential role in the regulation of fatty acids mobilization, because HSL catalyses the rate-limiting step to the hydrolysis of triacylglycerol (TAG) in adipocytes. The mechanism(s) involved in somatotropin (ST or growth hormone GH), changes in rates of lipolysis and on cell response to β-adrenergics are not defined. However, tissue cultures datas demonstrated that ST stimulates rates of lipolysis through a relief from the inhibition of G-protein on adenylate cyclase, specifically alfa 2 subunity, which leads to greater concentrations of cAMP and greater HSL activity. The objective of this work was to study the effect of ST on gene expression of HSL and Gi alfa 2 in adipose tissue. Six crossbred cows were used to obtain explants for tissue culture for HSL activity assays and mRNA abundance of HSL and G-proteins. Explants of 30 mg were cultured for 48 hours in medium 199 with sodium bicarbonate 25 mM and HEPES (pH 7,4; 37°C) and 5% de CO2, with two treatments: 1) Control: insulin (100 ng/ml) plus dexametasone (10 nM) and 2) bST: insulin (100 ng/ml), dexametasone (10 nM), and bST (100 ng/ml, STr-Monsanto). The HSL activity was determined by NEFA release in incubations of homogenate with endogenous lipids and the HSL and Gi2-alfa RNAm concentration determined by QC-RT-PCR using competitive cDNA sequence. The activity of HSL increased on tissues treated with ST (19.97 to 25.37 nMol/mg protein.h for control and ST treatments; p<0.05; n=5; sd 1.36). There were no differences (p>0.05) on Giα2 RNAm abundance (0.46 and 0.55 x 10-3 fentomol for control and ST treatments; n=5; sd 0.25). ST increase HSL mRNA (p<0.06; 0.08 and 0.13 x 10-5 fentomol for control and ST treatment- n=5; sd 0.03). Results confirm the hypothesis that amount of Gi is not change by ST. Previous data suggested small increases in HSL activity after ST treatment, results from this experiment confirm that HSL mRNA is increased by ST treatment in vitro.
 
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Date de Publication
2021-09-19
 
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