O objetivo do estudo foi avaliar o efeito de oito níveis de suplementação de vitamina C (ácido ascórbico) nas dietas (0; 50; 100; 200; 400; 600; 800 e 1.000 mg/kg da dieta), no processo de reversão sexual da tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) (T0, T50, T100, T200, T400, T600, T800 e T1000; n = 3). Cada unidade experimental foi composta por 600 pós-larvas estocadas em hapas de 0,08 m³. Os parâmetros avaliados foram: ganho de peso (mg) e incremento em comprimento (mm) aos 0, 10, 20 e 30 dias de tratamento; porcentagem da sobrevivência final (S%) e porcentagem de reversão sexual (RS%). Os resultados das biometrias indicaram que a partir do dia 20 os indivíduos apresentaram diferença significativa para peso e comprimento (P>0,0001). Os resultados do teste de comparação de médias (Tukey) mostraram que em relação ao ganho de peso, os melhores resultados foram obtidos com suplementação acima de 800 mg de vitamina C/kg da dieta, e para comprimento total, níveis de inclusão acima de 400 mg/kg; os piores desempenhos observados estavam em níveis abaixo de 50 mg/kg. Com relação à S%, foi verificado que a suplementação de vitamina C acima de 200 mg/kg proporciona médias semelhantes e o tratamento sem adição de vitamina C proporciona os piores resultados. Em relação à RS%, não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre os tratamentos (P>0,9993), indicando que a suplementação de vitamina C na dieta não afeta a taxa de reversão sexual da tilápia do Nilo. As equações de regressão polinomial para peso, comprimento total e sobrevivência, indicam que os níveis de suplementação de vitamina C na dieta para obtenção dos melhores resultados foram, respectivamente, 859,5; 765,0 e 685,7 mg de vitamina C por kg da dieta.