O tratamento crônico com hormônio de crescimento (GH) reduz a sensibilidade do tecido adiposo à ação da insulina. No entanto, inúmeras questões ainda existem para explicar o mecanismo exato pelo qual o GH reduz a sensibilidade à insulina. Este projeto teve como objetivo ampliar o conhecimento do efeito do hormônio de crescimento na cascata de sinalização da insulina, incluindo avaliar a concentração do substrato-1 do receptor da insulina (IRS-1), substrato-3 do receptor da insulina (IRS-3) e da PI 3-quinase, fosforilação do (IRS-1) e do (IRS-3), bem como, a interferência deste hormônio na associação entre IRS-1/PI 3-quinase e IRS-3/PI-quinase. Estes estudos foram conduzidos em um modelo de cultura crônica de tecido adiposo com GH, que preserva o efeito homeorrético de redução da sensibilidade à insulina. Para avaliar os efeitos de exposição do tecido adiposo ao GH, os explantes foram submetidos a dois ensaios em meio de cultura 199 com: Ensaio I (48 horas): a) I + D (100 ng/ml insulina + 10 mM dexametasona); b) I + D + GH (100 ng/ml insulina + 10 mM dexametasona + 100 ng/ml GH). Ensaio II (24 horas): a) controle (sem adição de hormônio); b) GH (100 ng/ml). Metade dos explantes do ensaio II, após 24 horas de cultura, foram estimulados com insulina (1 µg/ml) por 20 min. Os resultados, consistentes com a literatura, demonstraram uma redução de mesma magnitude (~30%) na concentração de IRS-1 em ambos os ensaios onde adipócitos de ratos foram cronicamente tratados com GH por 24 e 48 horas. Os níveis proteicos de IRS-3 variaram entre ensaios, onde pode ser encontrada uma redução de 15% no ensaio de 24 horas e de 27%, no de 48 horas. A concentração da PI 3-quinase apresentou uma redução média de 27% em ambos os tratamentos com GH por 24 e 48 horas. O IRS-1 e o IRS-3 apresentaram redução de 44 e 28%, respectivamente, em suas associações com a PI 3-quinase após estímulo insulínico nos explantes tratados com GH por 24 horas e uma redução de 28% foi observada na fosforilação do IRS-3 nesses explantes. Estes dados sugerem que o tratamento crônico com hormônio de crescimento altera os passos iniciais da sinalização insulínica, possivelmente cooperando para uma alteração da sensibilidade do tecido a este hormônio.

The growth hormone treatment (GH) decreases the adipose tissue sensitivity to the insulin action. However, the exact molecular mechanism remains unclear. ln the present study, we have employed an organ maintenance system for adipose tissue in order to better characterize the cellular basis of the insulin resistance effect of GH. The objective of this project was to amplify the knowledge of the growth hormone effects on the insulin signal cascade through determination of the insulin receptor substrate -1 (IRS-1), -3 (IRS-3) and PI 3-kinase (PI-3K) concentrations, IRS-1 and IRS-3 phosphorylation’s and the associations of these substrates with PI 3-kinase. ln order to analyze the effects of the adipose tissue exposition to GH, explants were subjected to two essays in 199 medium containing: Essay I (48 horas): a) I + D (100 ng/ml insulin + 10 mM dexamethasone); b) I + D + GH (100 ng/ml insulin + 10 mM dexamethasone + 100 ng/ml GH). Essay II (24 horas): a) control (no hormone addition); b) GH (100 ng/ml). After 24 hours’ culture, half of the essay II explants were stimulated with insulin (1 µg/ml) for 20 min. The results, consistent with the literature, showed a reduction of the same magnitude (~30%) in the concentration of IRS-1 in both essays where adipocytes where chronically treated with growth hormone for 24 and 48 hours. The IRS-3 protein levels varied between essays, being a reduction of 15% encountered in the 24 hours’ essay, and a reduction of 27% in the 48 hours. The PI 3-kinase concentration reduced 27% in both GH treatments for 24 and 48 hours. The IRS-1 and IRS-3 showed a reduction of 44 e 28%, respectively, in their associations with PI 3-kinase after 20 min insulin stimulation in the 24 hours GH treated explants and, in the same explants, after insulin stimulus, the IRS-3 phosphorylation was reduced 28%. These data suggest that chronically GH treatment alters the early steps of insulin signal transduction pathway, possibly cooperating with an alteration in the adipose tissue sensitivity to insulin.