Foram estudados os três parâmetros - fixação de ¹⁵N_2’, redução de C₂H₂ e evolução de H₂ para medida da fixação de N₂ em nódulos de plantas de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) de diferentes idades, desenvolvidas em condições controladas de luz e temperatura. A redução de C₂H₂, cuja metodologia foi caracterizada em laboratório, foi positivamente correlacionada com o N fixado. Demonstrou-se que a técnica necessita de padronização rigorosa na amostragem e que deve ser criteriosa para minimizar os erros experimentais. Cuidados com a incubação dos nódulos (tempo, temperatura adequados) e armazenamento das amostras para cromatografia, podem diminuir muito as variações entre as repetições. Não foi encontrada diferença significativa na redução de C₂H₂ pelos sistemas estudados - raízes noduladas, plantas inteiras perturbadas ou plantas intactas, na primeira hora de medida. A medida da evolução de H₂ foi detectada em nódulos com mais de 20 dias de idade, foi positivamente correlacionada com fixação de N₂ e redução de C₂H₂, sendo decisiva para manter o equilíbrio no balanço eletrônico entre os três parâmetros estudados. A máxima evolução de H₂ ocorreu entre 20-30 dias apôs plantio, nas condições de “fitotron”. Dois métodos foram aplicados para obtenção das razões C₂H₂: N₂ e C₂H₄/(3N₂ + H₂). No primeiro, valores entre 3,0 a 11,4 foram obtidos, incubando-se plantas inteiras perturbadas. O balanço eletrônico C₂H₄/(3N₂ + H₂) entre os dados variou de 1,57 a 1,75. No segundo método, usando raízes noduladas de diferentes plantas para determinação do N fixado e redução de C₂H₂, as médias das razões C₂H₂:N₂ estiveram entre 7,4 a 8,3 para todas as idades. O balanço eletrônico “in vivo” C₂H₄/( 3N₂ + H₂) proporcionou valores superiores a 1, de 1,32 a 1,43. Estes dados sugerem que pode estar havendo uma superestimativa da fixação real de N₂ pelo método da redução de C₂H₂. Neste caso, precauções devem ser tomadas ao se utilizar a técnica da redução de C₂H₂ para estimativa da fixação de N₂ em feijoeiro, uma vez que ela pode superestimar em média 32-43% do seu valor real. Nódulos com idade entre 20 a 30 dias proporcionaram medidas dos três parâmetros (fixação de ¹⁵N₂, redução de C₂H₂ e evolução de H₂) com menores variações.

To measure N₂ -fixation in nodules of beans (Phaseolus vulgaris L.), of different ages and kept under controlled light and temperature conditions, three parameters – ¹⁵N₂- fixation, C₂H₂ reduction and H₂ evolution - have been studied. C₂H₂ reduction, the method for which was characterized in the laboratory, was definitely related to the N₂-fixed. It was demonstrated that a standardization for sampling is necessary and criterium should be established to keep experimental errors to a minimum. ln order to greatly decrease the variation between replications, the nodules should be carefully incubated (adequate time and temperature), and also the samples should be carefully stored for chromatography. No significant difference was found in C₂H₂ reduction in the systems studied - nodulated roots, disturbed whole plants and intact plants - in the first hour of measurement. H₂ evolution was detected in nodules over 20 days of age and was definitely related to N₂-fixation and C₂H₂ reduction. It was noted that it is absolutely essential to maintain the equilibrium between the three parameters in the electron balance ratio. Maximum H₂ evolution occurred 20 - 30 days after planting, under phytotron conditions. Two methods were used to obtain the ratios C₂H₂:N₂ and C₂H₄/(3N₂ + H₂). Values from 3.0 to 11.4 were obtained using the first method - incubation of disturbed whole plants. The electron balance values were over 1, varying from 1.32 to 1.43. These data suggest that overestimation of actual N₂ -fixation using the C₂H₂ reduction technique might be occurring. ln this case, this method should be used with great care to avoid an overestimation of on average 32 - 43% of the actual value. Variation was smaller between the measures of the three parameters when 20 - 30 days old nodules were used.