• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.11.2011.tde-11022011-083500
Document
Author
Full name
Leonardo Soriano
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Piracicaba, 2010
Supervisor
Committee
Mourão Filho, Francisco de Assis Alves (President)
Costa, Maria Angélica Pereira de Carvalho
Yaly, Mariangela Cristofani
Title in Portuguese
Hibridação somática visando à produção de genitores tetraplóides para o melhoramento de cultivares copa de citros
Keywords in Portuguese
Cultura de tecidos vegetais
Embriogênese somática
Frutas cítricas
Hibridação
Melhoramento genético vegetal
Protoplasmos
Abstract in Portuguese
A hibridação somática via fusão de protoplastos é um método de combinação genética que agrega integralmente os dois genomas genitores, assim como suas respectivas organelas citoplasmáticas, sendo uma ferramenta alternativa aos métodos convencionais de melhoramento. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de híbridos somáticos interespecíficos de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck) 'Pêra' e 'Westin' com a tangerina 'Fremont' (C. clementina hort. ex Tan. x C. reticulata Blanco), 'Thomas' (C. reticulata Blanco) e 'Nules' (C. clementina hort. ex Tan), e o tangelo 'Nova' (C. reticulata Blanco x C. paradisi Macf.) visando à produção de genitores tetraplóides com características agronômicas desejáveis. Como fontes de protoplastos foram utilizados calos embriogênicos de laranja e folhas jovens de tangerina e tangelo, coletadas de plantas cultivadas em casa-de-vegetação. Para o isolamento dos protoplastos, as células de ambas as fontes foram imersas em solução enzimática e incubadas no escuro por 14 horas, sob agitação. Após o isolamento, os protoplastos isolados de calos foram fundidos quimicamente (polietilenoglicol - PEG) com protoplastos não embriogênicos, isolados de mesofilo foliar. Em seguida, os protoplastos foram plaqueados nos meios de cultura líquido BH3, EME e BH3 + EME, e incubados em ausência de luz, sob temperatura de 27 ºC. Após 20 dias de incubação, foram iniciados subcultivos sequenciais para nutrição e redução do potencial osmótico do meio de cultura. Os microcalos desenvolvidos foram transferidos para meio de cultura EME + maltose (13 g.L-1) para a indução da embriogênese somática. Os embriões desenvolvidos foram transferidos para meio de cultura EME + sacarose (25 g.L-1) e em seguida para o meio de cultura 1500 (1,5 g.L-1 de extrato de malte) e finalmente para o meio B+ para desenvolvimento e germinação. As plantas regeneradas foram individualizadas, enraizadas ou microenxertadas e aclimatizadas em casa-devegetação. A confirmação da hibridação somática foi feita por análise morfológica, determinação da ploidia, por citometria de fluxo e análise do DNA com marcadores moleculares do tipo SSR e RAPD. Foram obtidos híbridos somáticos de três combinações (Pêra + Fremont, Pêra + Nules e Pêra + Nova) os quais serão avaliados para utilização diretamente como copa ou como genitor tetraplóide em programas de melhoramento de citros.
Title in English
Somatic hybridization in order to obtain tetraploid parents for citrus scion improvement
Keywords in English
Citrus
Embriogênese
Genetic plant breeding
Plant tissue culture
Protoplasts.
Somatic embryogenesis
Somatic hybridization
Abstract in English
Somatic hybridization by protoplasts fusion is a method of genetic combination of two parental genomes, and their cytoplasmic organelles. It is an alternative tool to conventional breeding methods. The objective of this work was to obtain interspecific somatic hybrids of 'Pera' and 'Westin' sweet oranges (Citrus sinensis L. Osbeck) with 'Fremont' (C. clementina hort. ex Tan. x C. reticulata Blanco), 'Thomas' (C. reticulata Blanco) and 'Nules' (C. clementina hort. ex Tan) mandarins and Nova tangelo (C. reticulata Blanco x C. paradisi Macf.) to produce tetraploid parents with desirable agronomic characteristics. The sources of protoplasts were sweet orange embryogenic callus and mandarin and tangelo young leaves, collected from plants cultivated in screenhouses. For protoplasts isolation, cells from both sources were immersed in enzyme solution and incubated in the dark for 14 hours (40 rpm). After isolation, the protoplasts isolated from callus were fused chemically (polyethylene glycol - PEG) with non embryogenic protoplasts, isolated from leaf mesophyll. The protoplasts were cultivated in BH3, BH3 + EME and EME liquid culture media and incubated in the dark, under temperature of 27 ºC. After 20 days of incubation, subcultures were initiated in order to reduce the osmotic potential of culture medium. The microcalus developed were transferred to EME medium supplemented with maltose (13 g.L-1) to induce somatic embryogenesis. The developed embryos were transferred into EME + sucrose (25 g.L- 1), culture medium 1500 (1.5 g.L-1 of malt extract) or B+ culture medium for development and germination. The regenerated plants were individually rooted or micrografted, and further acclimatized in screenhouse. Somatic hybridization was confirmed by analysis of leaf morphology, ploidy determination by flow cytometry and molecular analysis by SSR and RAPD markers. Somatic hybrids were obtained of the three combinations (Pera + Fremont, Pêra + Nules and Pêra + Nova) which will be evaluated for direct are as scion or as a tetraploid parent in citrus breeding programs.
 
WARNING - Viewing this document is conditioned on your acceptance of the following terms of use:
This document is only for private use for research and teaching activities. Reproduction for commercial use is forbidden. This rights cover the whole data about this document as well as its contents. Any uses or copies of this document in whole or in part must include the author's name.
Leonardo_Soriano.pdf (3.61 Mbytes)
Publishing Date
2011-02-16
 
WARNING: The material described below relates to works resulting from this thesis or dissertation. The contents of these works are the author's responsibility.
  • SORIANO, L., et al. In vitro organogenesis of Rangpur Lime. Revista Brasileira de Fruticultura , 2012, vol. 34, p. 349-355.
  • SORIANO, L., et al. Regeneration and characterization of somatic hybrids combining sweet orange and mandarin/mandarin hybrid cultivars for citrus scion improvement [doi:10.1007/s11240-012-0204-z]. Plant Cell, Tissue and Organ Culture [online], 2012, vol. 111, p. 385-392.
  • SORIANO, L., et al. Organogênese in vitro de limão 'Cravo'. In XII Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal "Desafios para produção de alimentos e bioenergia", Fortaleza - CE, 2009. Anais do XII Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal.Fortaleza - CE : Sociedade Brasileirade Fisiologia Vegetal, 2009. Resumo.
  • SORIANO, L., MENDES, B. M. J., e MOURÃO FILHO, Francisco de Assis Alves. Fusão de protoplastos de laranja doce e tangelo visando à obtenção de híbridos somáticos interespecíficos. In XII Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal "Desafios para produção de alimentos e bioenergia", Fortaleza - CE, 2009. Anais do XII Congresso Brasileiro de Fisiologia Vegetal.Fortaleza - CE : Sociedade Brasileira de Fisiologia Vegetal, 2009. Resumo.
All rights of the thesis/dissertation are from the authors
Centro de Informática de São Carlos
Digital Library of Theses and Dissertations of USP. Copyright © 2001-2019. All rights reserved.