Clorose variegada dos citros (CVC), também conhecida como amarelinho, é uma das doenças de citros mais severas da citricultura brasileira. A CVC é causada pela bactéria limitada ao xilema Xylella fastidiosa. Esta bactéria afeta principalmente as variedades de laranja doce e foi relatada pela primeira vez em 1987 nos Estados de São Paulo e Minas Gerais. O genoma de X. fastidiosa linhagem 9a5c foi completamente seqüenciado e revelou muitos genes provavelmente envolvidos na patogenicidade desta bactéria. Entre estes genes estão as endoglicanases, que são enzimas degradadoras de componentes da parede celular vegetal do hospedeiro e as adesinas, que são proteínas envolvidas na adesão das células bacterianas no xilema, como também auxiliam na formação de agregados bacterianos que causam a obstrução dos vasos do xilema, interferindo no transporte de água e sais minerais para todas as partes da planta, levando ao aparecimento dos sintomas relacionados a CVC. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de mutantes de X. fastidiosa linhagem J1a12, pela disrupção das ORFs Xf-810, Xf-818 e Xf-2708, que apresentam função putativa de endoglicanases, da ORF Xf-2359 possivelmente relacionada à uma pectate liase e da ORF Xf-1940, que apresenta similaridade de seqüência à metionina sulfoxido redutase, proteína identificada com a função de possuir adesão funcional na superfície da célula bacteriana. Neste trabalho, duas estratégias foram utilizadas para a construção dos vetores de disrupção das ORFs selecionadas no genoma de X. fastidiosa: (1) substituição das ORFs pelo gene yfp, que codifica a proteína fluorescente amarela e, (2) inserção do cassete lacZ-Kam^R interrompendo a região codificadora das ORFs. Estes vetores foram usados para transformar X. fastidiosa, linhagem J1a12 por eletroporação e confirmou-se a obtenção das bactérias mutantes por reações em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos específicos.

Variegated Clorose of the citros (CVC), also known as "amarelinho", is one of the more severe diseases of citrus of the Brazilian Citrus plantation. CVC is caused by Xylella fastidiosa, a limited bacteria to the xylem. This bacterium affects mainly sweet orange varieties and it was reported for the first time in 1987 in the states of São Paulo and Minas Gerais. The genoma of X. fastidiosa strain 9a5c was completely sequenced and it revealed many genes probably involved in the patogenicity of the bacteria. Among the genes, are the endoglucanases, that are degradative enzymes of the host cell wall components and the adesins, that are proteins involved in the adhesion of the bacterial cells in the xylem, as well as they aid in the formation of bacterial aggregation that cause the obstruction of the xylem vessels interfering in the transport of water and mineral salts for all the parts of the plant, providing the emergence of the symptoms related to CVC. The objective of this work was to produce mutants of X. fastidiosa strain J1a12, by disruption of the ORFs Xf-810, Xf-818 and Xf-2708, that present putative function of endoglucanases, Xf-2359 possibly related to a pectate liase and of Xf-1940, that presents sequence similarity to the methionine sulfoxide reductase, identified protein with the functional function of adhesion in the surface of the bacterial cell. In this work, two strategies were used for the construction of the disruption vectors of the selected ORFs in the X. fastidiosa genome: (1) substitution of the ORFs for the yfp gene, that codifies for the yellow fluorescent protein and, (2) insertion of the lacZ-Kam^R cassette into the coding region of the ORFs. These vectors were used to transform X. fastidiosa strain J1a12 by electroporation and the mutants produced were confirmed by polymerase chain reactions (PCR) with specific oligonucleotids.