A L-lisina α-oxidase (LO) de Trichoderma harzianum é uma enzima da família das Laminoácido oxidases (LAAOs), flavoproteínas que são alvo de grande interesse médico devido a sua alta toxicidade sobre diversos patógenos e linhagens de células tumorais. A LO é de grande interesse biotecnológico, porque assim com outras LAAOs, pode promover a depleção de aminoácidos do ambiente tumoral, afetando reações metabólicas essenciais para o crescimento das células do câncer. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial anticâncer da LO recombinante (rLO) de T. harzianum, bem como caracterizar o tipo de morte induzido e as vias de sinalização envolvidas. Inicialmente, foram determinadas as condições de estocagem para melhorar a estabilidade de rLO e nossos resultados mostraram que rLO é mais estável quando armazenada em solução de glicerol 50%. Determinou-se que a cauda de GST a qual rLO está fusionada é importante para a estabilidade da enzima e por isso foi mantida. Porém, a proteína GST sozinha não foi tóxica para as células, indicando que o efeito observado é atribuído a rLO. Em seguida, a toxicidade foi testada em células Jurkat por citometria de fluxo e observou-se que concentrações maiores que 1 mU/mL de rLO reduziram significativamente a viabilidade de Jurkat, apresentando um efeito dose-dependente. Além disso, os marcadores Anexina V-FITC e PI foram utilizados para rastrear eventos de apoptose e apoptose tardia, que foi confirmado por citometria de fluxo. Também foi feita uma análise de microscopia time-lapse que mostrou que as células estimuladas com rLO entram em apoptose depois de cerca de 8 horas do tratamento. A toxicidade de rLO também foi testada em células não tumorais da linhagem HEK 293T que não teve a viabilidade afetada por rLO, bem como não induziu apoptose nesse tipo celular. Por fim, estudou-se, através do uso de inibidores, as possíveis vias de sinalização envolvidas na indução de morte das células Jurkat tratadas com rLO. As vias que responderamm ao estímulo de rLO foram ERK, JNK e p38. Conclui-se, portanto, que LO é capaz de reduzir a viabilidade e promover apoptose em células da linhagem Jurkat através da ativação de MAPKs que regulam diversas atividades celulares relacionadas ao desenvolvimento do câncer, incluindo proliferação, diferenciação, apoptose, autofagia e inflamação.

L-lysine α-oxidase (LO) from Trichoderma harzinaum is an enzyme of the L-amino acid oxidase´s (LAAOs) family. LAAOs are flavoproteins that are the subject of great medical interest because of its high cytotoxicity on various pathogens and tumor cell lines. Like others LAAOs, LO can promote amino acid depletion of the tumor environment, affecting metabolic reactions essential for tumor cell growth. Thus, this work proposes to evaluate the anticancer potential of recombinant LO from T. harzianum, as well as to characterize the type of induced death and the signaling pathways applied. Initially, storage conditions were defined to improve the stability of LO and our results show that LO is more stable when stored in 50% glycerol solution. We determined the GST tag which LO is fused is important for enzyme stability so it was maintained. However, a GST protein alone was not toxic to cells, indicating that the effect observed is attributed to LO. Next, the LO´s toxicity was tested on Jurkat cells by flow cytometry and we observed that doses higher than 1 mU/mL of LO reduced Jurkat viability, exhibiting a dose-dependent effect. In addition, Annexin V-FITC and PI markers were used to track apoptosis and late apoptosis events, which were confirmed by flow cytometry. A time lapse microscopy analysis was performed which showed that cells stimulated with LO go in apoptosis after 8 hours of treatment. The toxicity of rLO was also tested in HEK 293T cells line, a non-tumor cell type. The rLO did not affect the cell viability and didn´t induce apoptosis in this cells. Finally, we used some inhibitors to determine the signaling pathway that is involved in LO mechanism in Jurkat cells. The p38, JNK and ERK reacted to LO´s stimulus. We concluded that LO is able to reduce viability and promote apoptosis in Jurkat cell line by activating MAPKs that regulate various physiological activities related to cancer development including proliferation, differentiation, apoptosis, autophagy and inflammation.