O câncer de mama é uma das neoplasias mais comuns, ficando atrás apenas do câncer de pulmão em números brutos de casos. Possui uma alta taxa de sobrevida, cerca de 90%, no entanto, a progressão tumoral para metástase leva a uma diminuição expressiva da sobrevida do paciente para cerca de 25%, sendo considerada um dos principais maus prognósticos dessa neoplasia. No início do processo metastático, as células passam pela transição epitélio-mesenquimal (EMT), levando as células epiteliais a desenvolverem características de células mesenquimais, adquirindo motilidade à medida que perdem a adesão célula-célula. Além disso, esse processo afeta a expressão e sinalização de diversas proteínas da superfície celular. O objetivo nesse trabalho foi de avaliar a participação de proteínas de superfície durante a indução da EMT em células de câncer de mama. Para isso, utilizamos células de câncer de mama induzidas à EMT pelo tratamento com fator de crescimento epidérmico (EGF). Com essas células induzidas, coletamos dados proteômicos que indicaram alterações na expressão de proteínas de superfície, como o Síndecan-4 (SDC4) que apresentou uma diminuição em relação ao controle. Com o intuito de avaliarmos a participação dessa proteína durante o processo de EMT em células de câncer de mama, utilizamos um inibidor indireto de SDC4, o Lincitinibe (OSI-906), que age inibindo a autofosforilação de IGF-1R. A partir de ensaio de MTT e de apoptose com Anexina V, o tratamento foi estabelecido utilizando 72 nM de OSI-906 por 12 horas, no qual, foi possível verificar que, em ensaios de migração célula, a diminuição da expressão de SDC4 elevou a atividade migratória celular em células EMT positivas. Também foi observado, a partir de ensaios de zimografia e de "Western blotting" das proteínas secretadas, que durante a EMT ocorre um aumento na expressão e atividade da matriz metaloproteinase 9 (MMP-9), a qual está diretamente relacionada ao processo de clivagem proteolítica na superfície celular de diversas proteínas, incluindo o SDC4, o qual apresentou um aumento na porção extracelular liberada nas amostras de secretoma. No tratamento com OSI-0906, foi observado uma diminuição tanto da atividade da MMP-9 como na diminuição da clivagem de SDC4. Essa observação corrobora com nossos dados proteômicos, que mostraram um aumento na detecção de peptídeos da região extracelular do SDC4 nas amostras de secretoma. Ademais, nossos achados são sustentados por estudos que mostraram a eficiência da redução da expressão indireta de SDC4 utilizando compostos inibidores de IGF-1R. Além disso, Na literatura foi demonstrado que a depleção dessa proteína em MCF-7 aumenta a migração celular e que, o aumento do processo de clivagem proteolítica, está correlacionado com o aumento da atividade de MMP-2 e 9. O processo de clivagem pode ser uma forma de regulação da atividade aderente da proteína durante a progressão tumoral. Nossos resultados salientam a participação de SDC4 no processo de EMT, uma vez que, quando indiretamente inibida, promove um aumento no processo de migração celular. Sendo assim, futuros estudos com ativadores ou inibidores diretos de SDC4 podem favorecer o combate ao desenvolvimento de metástase no câncer de mama.

Breast cancer is one of the most common neoplasms, only behind to lung cancer in total case numbers. It has a high survival rate, around 90%; however, the presence of metastasis leads to a significant decrease in patient survival to about 25%, making it one of the major poor prognostic factors for this neoplasm. In the early stages of the metastatic process, cells undergo epithelial-mesenchymal transition (EMT), causing epithelial cells to develop mesenchymal characteristics, gaining motility as they lose cell-cell adhesion. Additionally, this process affects the expression and signaling of various cell surface proteins. The aim of this study was to evaluate the involvement of surface proteins during EMT induction in breast cancer cells. To achieve this, we used breast cancer cells induced to the EMT process through treatment with epidermal growth factor (EGF). With these induced cells, we collected proteomic data indicating changes in the expression of surface proteins, such as Syndecan-4 (SDC4), which showed a decrease compared to the control. To assess the involvement of this protein during the EMT process in breast cancer cells, we used an indirect inhibitor of SDC4, Lincitinib (OSI-906), which inhibits IGF-1R autophosphorylation. Through MTT assays and apoptosis with Annexin V, we established the treatment using 72 nM of OSI-906 for 12 hours, during which it was observed that, in cell migration assays, indirect inhibition of SDC4 increased cell migratory activity in EMT-positive cells. Furthermore, zymography assays and Western blotting of secreted proteins revealed an increase in the expression and activity of matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) during EMT, which is directly related to proteolytic cleavage on the cell surface of various proteins, including SDC4. SDC4 showed an increase in the extracellular portion released in secretome samples. In the OSI-0906 treatment, a decrease in both MMP-9 activity and SDC4 cleavage was observed. This observation aligns with our proteomic data, which showed an increase in the detection of peptides from the extracellular region of SDC4 in secretome samples. Moreover, our findings are supported by studies demonstrating the effectiveness of indirect SDC4 inhibition using IGF-1R inhibitor compounds. Additionally, literature has shown that inhibiting this protein in MCF-7 increases cell migration, and the increase in proteolytic cleavage is correlated with increased MMP-2 and 9 activity. Cleavage may be a form of regulation of the adhesive activity of the protein during tumor progression. Our results highlight the involvement of SDC4 in the EMT process, as indirect inhibition promotes an increase in cell migration. Thus, future studies with direct activators or inhibitors of SDC4 may aid in combating the development of metastasis in breast cancer.