Este estudo teve como objetivo contribuir para o entendimento do papel das proteínas vacuolares transportadoras de cálcio na regulação da expressão dos genes de T. reesei que atuam na desconstrução da biomassa lignocelulósica. Para isto, realizamos a caracterização funcional de 4 proteínas transportadoras de cálcio que foram identificados previamente pelo grupo. Para tanto, obtemos linhagens mutantes com a ausência de cada uma destas proteínas. Ensaios de crescimento mostraram que as linhagens mutantes crescem mais que a linhagem parental na presença de xilose e galactose. Isto indica que as proteínas em estudo estão envolvidas com o metabolismo destes açúcares. Adicionalmente, não observamos diferenças significativas de crescimento na presença de diferentes concentrações de cálcio em glicose, mostrando que as proteínas vacuolares transportadoras de cálcio não estão envolvidas com a resistência ao íon. Por meio de ensaios de atividade enzimática foi observado que o aumento da atividade celulolítica que ocorre na linhagem parental com a adição de cálcio não ocorreu nas linhagens mutantes. Este evento foi investigado também por meio da avaliação da expressão gênica de celulases, onde a mesma inibição foi observada. É possível que com a ausência das proteínas transportadoras de cálcio, o cálcio fique retido dentro dos vacúolos, já que 3 mutantes avaliados apresentam ausência do canal de cálcio YVC1, responsável pela saída do cálcio nos vacúolos. Estes resultados mostram o envolvimento da via de sinalização mediada por cálcio, especialmente dos transportadores vacuolares, na regulação da expressão de celulases em T. reesei, possibilitando a identificação de novos alvos para a otimização do processo de degradação de biomassa lignocelulósica.

This study aimed to contribute to the understanding of the role of vacuolar calcium transport proteins in regulating the expression of T. reesei genes that act in the deconstruction of lignocellulosic biomass. To achieve this, we carried out the functional characterization of 4 calcium transport proteins that were previously identified by the group. To this end, we obtained mutant strains with the absence of each of these proteins. Growth assays demonstrated that the mutant strains grow more than the parental strain in the presence of xylose and galactose. This indicates that the proteins under study are involved in sugar metabolism. Furthermore, we did not observe significant differences in growth in the presence of different concentrations of calcium in glucose, showing that vacuolar calcium transport proteins are not involved in resistance to the metal. Through enzymatic activity assays, it was observed that the increase in cellulolytic activity that occurs in the parental strain with the addition of calcium did not occur in the mutant strains. This event was also investigated through the evaluation of cellulase gene expression, where the same change was observed. It is possible that with the absence of calcium transport proteins, calcium is retained within the vacuoles, since 3 mutants evaluated present an absence of the YVC1 calcium channel, responsible for the exit of calcium from the vacuoles. These results show the involvement of the calcium-mediated signaling pathway, especially vacuolar transporters, in the regulation of cellulase expression in T. reesei, enabling the identification of new targets for optimizing the lignocellulosic biomass manipulation process.