As células da micróglia são os macrófagos residentes do sistema nervoso central, atuando como principal linha de defesa e altamente responsiva a estímulos estressores. Diversas são os receptores e as vias intracelulares componentes do processo de ativação microglial, com destaque para os receptores P2X7 e TRPV1, dois sensores ativados em situações de estresse. Os receptores P2X7 são ativados por altas concentrações de ATP no meio extracelular enquanto os receptores TRPV1 são ativados por capsaicina e outros estímulos associados a dano, como acidez e altas temperaturas, além de canabinóides endógenos. A ativação de ambos os receptores é relacionada a ativação do inflamassoma NLRP3 e à liberação de vesículas extracelulares (VEs) em micróglia, mas não é claro de que forma os receptores interagem nesses processos. Nesse estudo, investigamos de que forma a modulação farmacológica de TRPV1, pela ativação com capsaicina ou bloqueio com o antagonista SB366791, interage com a ativação do inflamassoma NLRP3 e liberação de VEs induzidas pela ativação de receptores P2X7 por ATP. Para isso, as células linhagem murina de micróglia BV2 foram desafiadas com lipopolissacarídeo, tratadas com SB366791 (antagonista de TRPV1) e, por fim, estimuladas com ATP e/ou capsaicina. Foi observado que o tratamento com ATP e capsaicina induziram alterações na expressão de dímeros de TRPV1, podem ser indicativos de mecanismos de sensibilização e dessensibilização do receptor. O tratamento com ATP induziu ativação do inflamassoma NLRP3 nas células, apesar de não detectarmos as formas maduras de caspase-1 e IL-1β no lisado das células. O tratamento com capsaicina também induziu aumento de expressão de NLRP3 e pró-IL-1β e interagiu com os efeitos promovidos pelo tratamento com ATP na expressão de ASC, NLRP3 e pró-IL-1β. Na avaliação das VEs secretadas por micróglia, o tratamento com ATP induziu aumento da liberação de VEs, efeito esse revertido pelo tratamento com capsaicina. Dessa forma, constatamos uma intricada relação entre os receptores TRPV1 e P2X7 na ativação do inflamassoma e na liberação de VEs microgliais, sendo observados tanto efeitos sinérgicos quanto antagônicos frente a ativação de ambos os receptores. No entanto, mais experimentos são necessários para confirmar os mecanismos por trás desses fenômenos.

Microglia cells are the resident macrophages of the central nervous system, acting as the primary defense line and highly responsive to stress stimuli. There are several receptors and intracellular pathways involved in the microglial activation process, with a focus on the P2X7 and TRPV1 receptors, two sensors activated in stressful situations. P2X7 receptors are activated by high concentrations of ATP in the extracellular medium, while TRPV1 receptors are activated by capsaicin and other stimuli associated with damage, such as acidity and high temperatures, in addition to endogenous cannabinoids. The activation of both receptors is related to the activation of the NLRP3 inflammasome and the release of extracellular vesicles (EVs) in microglia, but it is not clear how these receptors interact in these processes. In this study, we investigated how the pharmacological modulation of TRPV1, through activation with capsaicin or blockade with the antagonist SB366791, interacts with the activation of the NLRP3 inflammasome and the release of EVs induced by the activation of P2X7 receptors by ATP. For this purpose, murine BV2 microglia cell line cells were challenged with lipopolysaccharide, treated with SB366791 (TRPV1 antagonist), and finally stimulated with ATP and/or capsaicin. It was observed that treatment with ATP and capsaicin induced changes in the expression of TRPV1 dimers, which may be indicative of receptor sensitization and desensitization mechanisms. Treatment with ATP induced activation of the NLRP3 inflammasome in the cells, although we did not detect mature forms of caspase-1 and IL-1β in the cell lysate. Treatment with capsaicin also induced an increase in the expression of NLRP3 and pro-IL-1β and interacted with the effects promoted by ATP treatment on the expression of ASC, NLRP3, and pro-IL-1β. In the evaluation of EVs secreted by microglia, treatment with ATP induced an increase in the release of EVs, an effect that was reversed by treatment with capsaicin. Thus, we observed an intricate relationship between TRPV1 and P2X7 receptors in the activation of the inflammasome and the release of microglial EVs, with both synergistic and antagonistic effects observed upon the activation of both receptors. However, further experiments are needed to confirm the mechanisms behind these phenomena.