As leishmanioses são zoonoses que afetam pele, mucosas ou vísceras, resultantes do parasitismo dos macrófagos pelo protozoário do gênero Leishmania, inoculado no organismo pela picada de flebótomos. Na região de Ribeirão Preto, há registro de casos autóctones de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), sendo Leishmania Viannia braziliensis e Leishmania Leishmania amazonensis as espécies implicadas, e Lutzomyia neivai seu vetor. Maxadilan (Max) é um peptídeo, presente na saliva de Lu. longipalpis, vetor da leishmaniose sistêmica ou calazar. Durante o repasto sanguíneo, seus mecanismos de vasodilatação e imunomodulação promovem campo perfeito para injeção do parasito no hospedeiro, produzindo resposta inflamatória mínima local. Sua capacidade imunomodulatória, desviando a resposta Th1 para Th2, implicam-no como fator de promoção da infecção. Diante destas evidências, Max (proteína e cDNA) tem sido empregado em vacina experimental para leishmaniose, conferindo proteção contra a infecção. Como a expressão de Max se limita exclusivamente a Lu. longipalpis, teve-se por objetivos: 1) detectar anticorpos anti-Max em soro de pacientes com LTA e 2) verificar a expressão do gene e da proteína Max em Lu. neivai, vetor na região estudada. Anticorpos anti-Max foram detectados por ELISA no soro de 41 pacientes com LTA e 63 controles. A extração de proteínas, DNA e RNA de Lu. longipalpis e Lu. neivai foi realizada pelo método Trizol. A detecção de proteínas foi feita por eletroforese. Para a detecção da proteína Max em ambos os vetores foram realizados Dot Blot e Immunoblotting (IB), utilizando-se soros de coelho imunizado contra Max, soros de coelhos sadios de biotério, e soros de pacientes com LTA e controles. A amplificação do gene Max foi feita por PCR-RFLP com primers específicos, e digestão com as enzimas Hha I e Rsa I, além do seqüenciamento do DNA. A expressão do gene Max foi obtida por RT-PCR. Títulos maiores de anticorpos anti-Max foram observados na LTA (p=0,0043). A eletroforese mostrou frações protéicas semelhantes para os dois vetores. A fração de peso molecular similar à proteína Max foi confirmada por IB com soro de coelho imunizado. Os grupos LTA, controles e coelhos de biotério apresentaram anticorpos contra proteínas de Lu. longipalpis e de Lu. neivai por Dot blot, inferindo-se serem anticorpos anti-Max. A amplificação de fragmento do gene Max, em amostra de Lu. neivai, foi confirmada por PCR-RFLP, e seu seqüenciamento mostrou 66,5% de homologia com o gene de Lu. longipalpis. A RT-PCR mostrou amplificação do cDNA da amostra de Lu. neivai, confirmando que o gene Max guarda homologia quando expresso em Lu. neivai. Presença de anti-Max nos grupos estudados tornou imprescindível a pesquisa de Max no vetor da LTA da região, registrando pela primeira vez a expressão protéica e gênica de Max símile em Lu. neivai. A detecção de anti-Max em controles e em animais de laboratório confirma exposição natural a picadas de flebótomos. Títulos de anti-Max maiores na LTA sugerem que exposição prévia e natural à picada e, conseqüentemente, à proteína Max, não protege contra a evolução da doença, desfavorecendo seu emprego isolado em vacinação.

Leishmaniasis are zoonoses that affect skin, mucosa or viscera, resulting from the parasitism of macrophages by the protozoa Leishmania, which is inoculated in the organism by sand fly bite. ln the region of Ribeirão Preto, autochthons cases of American Tegumentar Leishmaniasis (ATL) are present, being Leishmania Viannia braziliensis and Leishmania Leishmania amazonensis mainly species related, and Lutzomyia neivai as their vector. Maxadilan (Max) is a peptide present in the Lutzomyia longipalpis saliva, vector of systemic leishmaniasis. Their vasodilatory and immunomodulatory properties promote a perfect scenario for the inoculation of parasite in the host, with minimum inflammatory response. lts immunomodulatory capacity switches Th1 to Th2 cytokine profile promoting infection. Therefore, Max (protein and cDNA) has been used in experimental vaccines for leishmaniasis. Since Max is shown exclusively in Lu. Longipalpis saliva, the purposes of our study were: 1) to detect antibodies anti-Max in sera samples from patients with ATL and 2) to verify the genetic and protein expression of Max in L. neivai, vector of ATL in the area of study. Antibodies anti-Max were detected by ELISA in sera from 41 patients with ATL and 63 controls. The extraction of proteins, DNA and RNA from Lu. longipalpis and Lu. neivai was accomplished by the method Trizol, following for the detection of proteins by electrophoresis. Dot Blot and Immunoblotting (IB) were performed for the detection of Max in both vectors, using immune rabbit's serum against Max, sera from healthy rabbits, and from patients with ATL and controls. Max gene's fragment was amplified by PCR-RFLP with specific primers following by enzymatic restriction with Hha I and Rsa I, besides DNA sequencing. Max gene expression was performed by RT-PCR. Increased titles of anti-Max were observed in ATL (p=0.0043). Electrophoresis of proteins showed similar fractions for both vectors, and a protein fraction with molecular weight similarity to Max was confirmed by IB with immune rabbit serum. Patients with ATL, controls and healthy rabbits presented antibodies to proteins of Lu. longipalpis and Lu. neivai by Dot blot, inferring that these antibodies could be anti-Max. Amplification of Max's genetic fragment was confirmed by PCR-RFLP, which DNA sequencing showed 66.5% of homology. RT-PCR showed amplification of cDNA from Lu. neivai samples, supporting the idea that the Max gene has homology when expressed in Lu. neivai. The description of antibodies anti-Max in ATL patients and controls turned indispensable the research of Max in the phlebotomy vector of ATL in the area of study. Protein and genetic expression of Max-simile in Lu. neivai was registered for the first time. Antibodies anti-Max detection in controls and rabbits confirms the previous exposition to sand fly bites. Increased titles of anti-Max in ATL patients suggest that previous and natural exposition to the bite and, consequently, to the protein Max, do not protect them against the disease, therefore discouraging its isolated employment in vaccination.