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Doctoral Thesis
DOI
10.11606/T.22.2009.tde-29102009-140035
Document
Author
Full name
Paula Regina de Souza
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Ribeirão Preto, 2009
Supervisor
Committee
Andrade, Denise de (President)
Dalri, Maria Celia Barcellos
Falcão, Juliana Pfrimer
Ferreira, Adriano Menis
Watanabe, Evandro
Title in Portuguese
Análise microbiológica e genético-molecular da biota orotraqueal de paciente crítico: subsídios na prevenção da pneumonia associada à ventilação mecânica
Keywords in Portuguese
Biofilmes
Biologia Molecular
Luvas protetoras
Pneumonia Associada à Ventilação Mecânica
Pseudomonas
Staphylococcus
Abstract in Portuguese
A assistência em Unidade de Terapia Intensiva (UTI) é constantemente desafiada por infecções, que resultam no aumento da morbimortalidade, no tempo de internação e nos custos. Objetivos: avaliar os paciente críticos com tubo endotraqueal submetidos à ventilação mecânica na perspectiva clínica e microbiológica com a finalidade de determinar a dispersão de Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase-negativa e Pseudomonas aeruginosa na assistência respiratória destes pacientes. Assim, analisou aspectos quantitativos, perfil de sensibilidade aos antibióticos, similaridade genética e formação de biofilme em tubo traqueal considerando a presença ou não de PAVM. Trata-se de um estudo observacional prospectivo realizado na UTI de um hospital de emergência no interior do Estado de São Paulo. A coleta de dados clínicos envolveu pacientes adultos com período 48 horas de intubação endotraqueal em ventilação mecânica mediante consentimento do responsável. As amostras foram procedentes da saliva, secreção traqueal e tubo traqueal dos referidos pacientes; e da luvas utilizadas na aspiração do tubo endotraqueal. Utilizou-se no processamento das amostras recursos clássicos e avançados da microbiologia como Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence (ERIC-PCR), Eletroforese em Campo Pulsado e a microscopia eletrônica de varredura. A análise estatística pelo SPSS foi subsidiada em medidas de tendência central, tabelas de contingências, regressão múltipla e kappa, p<0,05. Na avaliação clínica dos 44 pacientes críticos, 34 (77,32%) eram masculinos, idade média de 39,9, e o motivo de hospitalização 19 (43,2%) foi devido à traumas. O período de hospitalização foi em média 10,9 dias (DP 9,3) e de permanência do tubo endotraqueal de 6,6 dias (DP 3,3). A ocorrência de infecção hospitalar foi de 31,2%, sendo que 15 (34,1%) eram PAVM; e 34,5% representaram o percentual de óbito. O período de permanência do tubo endotraqueal 8 dias foi fator de risco para PAVM (RR 4,00, p < 0,001) e regressão múltipla. Na análise microbiológica verificou-se que a presença das cepas foi variável em termos quantitativos segundo sua procedência. Houve predominância de contaminação nas luvas direitas com as cepas de Staphylococcus coagulase-negativa. A prevalência de resistência a oxacilina foi de 16,1% para Staphylococcus aureus e 22,6% Staphylococcus coagulasenegativa. Em termos de similaridade genética observou-se apenas um caso de Pseudomonas aeruginosa isoladas da saliva e tubo traqueal de um mesmo paciente. E, em 12 cepas evidenciou-se uma forte relação genética procedentes da saliva, do tubo traqueal. Dos Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase-negativa ambos resistente a oxacilina foram similares as cepas procedentes da saliva e secreção traqueal. O biofilme presente nos 30 tubos apresentou estruturas celulares e microbianas específicas como: hemácias, rede de fibrina, leucócitos, além de cocos, bacilos, filamentos e leveduras, dentre outras. Embora com número reduzido de amostras os resultados sinalizaram para a possibilidade de dispersão microbiana endógena tendo a cavidade orofaríngea como o principal reservatório. Outras investigações em diferentes UTIs, em termos de microbiota, condições clínicas e institucionais são promissoras para que se possa de fato ampliar as evidências em torno do risco de infecção respiratória do paciente crítico em ventilação mecânica.
Title in English
Microbiological and genetic molecular analysis of the orotracheal biota of critical patients: support in the prevention of mechanical ventilator-associated pneumonia.
Keywords in English
Biofilms
Gloves Protection
Molecular Biology
Pneumonia Ventilator-Associated
Pseudomonas.
Staphylococcus
Abstract in English
Care in Intensive Care Units (ICU) is constantly challenged by infections, which result in the increase of morbimortality, hospitalization length of stay and costs. Objectives: to assess critical patients with endotracheal tube on mechanical ventilation in the clinical and microbiological perspective, aiming to determine the diffusion of Staphylococcus aureus, coagulase-negative Staphylococcus and Pseudomonas aeruginosa in respiratory care to these patients. Quantitative aspects, sensitivity profile to antibiotics, genetic similarity and biofilm formation in tracheal tube considering the presence of mechanical ventilator-associated pneumonia (MVAP) were analyzed. It is an observational and prospective study carried out in the ICU of an emergency hospital in the interior of the state of São Paulo. Collection of clinical data involved adult patients in a period 48 hours of endotracheal intubation in mechanical ventilation, with the consent of the responsible person. Samples were collected from saliva, tracheal secretion and tracheal tube of the mentioned patients; and from the gloves used in aspiration of the endotracheal tube. Classic and advanced microbiological resources such as Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence (ERIC-PCR), Pulsed-Field Electrophoresis and electron scanning microscopy were used to analyze samples. Statistical analysis was done using SPSS and was supported by central tendency measures, contingency tables, multiple regression and kappa, p<0.05. The clinical evaluation showed that, of the 44 critical patients, 34 (77.32%) were male, with average age of 39.9 years. Trauma was the reason for hospitalization of 19 (43.2%) patients. The average period of hospitalization was 10.9 days (SD 9.3) and the period with endotracheal was 6.6 days (SD 3.3). The occurrence of cross infection was 31.2%, of which 15 (34.1%) were MVAP; and 34.5% represented the percentage of deaths. Length of stay of endotracheal tube 8 days was risk factor for MVAP (RR 4.00, p < 0.001) and multiple regression. Microbiological analysis showed that the presence of strains varied in quantitative terms according to their origin. There was predominance of contamination in right gloves with strains of coagulase-negative Staphylococcus. The prevalence of oxacillin resistance was 16.1% for Staphylococcus aureus and 22.6% for coagulase-negative Staphylococcus. As to the genetic similarity, it was observed only one case of Pseudomonas aeruginosa isolated from the saliva and tracheal tube of a same patient. In 12 strains, strong genetic relation from saliva and tracheal tube was evidenced. Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus, both oxacillin resistant, were similar to strains from saliva and tracheal secretion. Biofilm present in 30 tubes presented specific cellular and microbial structures, such as: red cells, fibrin network, leukocytes, besides cocci, rods, threads and yeasts, among others. Although with a reduced number of samples, results show the possibility of endogenous microbial diffusion, with the oropharynx cavity as the main reservoir. Further research in different ICUs, in terms of microbiota, clinical and institutional conditions, can broaden evidences regarding the risk of respiratory infection of critical patients on mechanical ventilation.
 
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PaulaReginaDeSouza.pdf (10.68 Mbytes)
Publishing Date
2009-11-03
 
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