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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.23.2016.tde-03112016-201553
Documento
Autor
Nome completo
Eduardo Kazuo Kohara
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2016
Orientador
Banca examinadora
Mendes, Fausto Medeiros (Presidente)
Cury, Jaime Aparecido
Machado, Maria Aparecida de Andrade Moreira
Prates, Renato Araujo
Siqueira Junior, Walter Luiz
Título em português
Estudo proteômico da saliva de adolescentes acometidos de lesões de cárie ativas em diferentes estágios de severidade
Palavras-chave em português
Cárie dentaria
Eletroforese
Espectrometria de massa
Proteínas
Saliva
Resumo em português
O presente estudo teve por objetivo comparar a composição da saliva de adolescentes com lesões de cárie ativas com a de jovens livres de lesões de cárie. Doze adolescentes com idade média de 15,2 (desvio padrão = 1,6) anos foram divididos em três grupos de acordo com acometimento pela cárie dentária: Grupo CA - participantes com o mínimo de quatro lesões cariosas cavitadas ativas (n=4), classificadas com os escores 5 e/ou 6 pelo Sistema Internacional de Detecção e Avaliação de Cárie (ICDAS, do inglês International Caries Detection and Assessment System); Grupo MB - adolescentes (n = 4) com pelo menos quatro lesões cariosas iniciais ativas (ICDAS 1 e/ou 2); e grupo CO - composto de participantes sem lesões de cárie ativas (n = 4). Proteínas provenientes de saliva estimulada (20 ?g) foram submetidas a espectrometria de massa e eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) em três experimentos independentes. Valores densitométricos de quinze bandas de diferentes pesos moleculares dos géis SDS-PAGE foram mensurados e analisados por análise de variância ( p<0,05). Espectrometria de massa foi realizada para identificar e caracterizar o proteoma das bandas que mostraram diferenças em três diferentes géis. A quantificação relativa consistiu na realização de eletroforese SDS-PAGE contendo proteínas salivares dos grupos MB e CO pareadas lado a lado de acordo com a concentração de proteínas total. As bandas foram analisadas densitometricamente e as proteínas nelas contidas foram também quantificadas por espectrometria de massa. Resultados encontrados na análise com SDS-PAGE revelaram que quatro bandas de alto e baixo peso molecular do grupo MB se mostraram estatisticamente quando comparadas ao grupo CO. As amostras do grupo CA não mostraram diferenças na comparação ao grupo CO. A análise por espectrometria de massa revelou o conteúdo proteico das amostras de saliva e das bandas eletroforéticas dos géis SDS-PAGE que demonstraram diferenças. A análise quantitativa relativa mostrou as diferenças entre os grupos nas bandas de alto, médio e baixo pesos moleculares, bem como das proteínas nelas presentes. Este estudo concluiu que existem diferenças na composição proteômica da saliva de adolescentes acometidos por cárie quando comparados a jovens sem lesões ativas, principalmente quando se considerou lesões de cárie iniciais.
Título em inglês
Salivary proteome of adolescents with active caries lesions with different severity stages
Palavras-chave em inglês
Dental caries
Electrophoresis
Mass spectrometry
Proteins
Saliva
Resumo em inglês
This study aimed to compare the salivary protein content of adolescents presenting active caries lesions with caries-free persons. Twelve adolescents with average age of 15.2 (standard deviation=1.6) years old were divided into three groups according to the caries occurrence: Group CA - participants with at least four active cavitated caries lesions (n = 4), classified as scores 5 and/or 6 according to the International Caries Detection and Assessment System (ICDAS); Group MB - adolescents (n = 4) in which subjects showed at least four cavitated active lesions (ICDAS 5 and 6), group MB (n=4) with at least four active initial caries lesions (scores 1 and/or 2 of ICDAS); and group CO - with subjects with no active caries lesions (n = 4). Proteins from stimulated saliva (20 ?g) were submitted to sodium-dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) in three independent experiments. Densitometric values from fifteen bands of different molecular weights were measured and analyzed with analysis of variance (p<0.05). Mass spectrometry was used to identify and characterize the proteome from electrophoretic bands. Relative quantification consisted in submit to SDS-PAGE salivary protein samples paired by total protein concentration from groups MB and CO. Electrophoretic bands were densitometrically analyzed, and their protein content were quantified with mass spectrometry. Results from SDS-PAGE revealed that four bands of high and low molecular weight from group MB were statistically higher when compared to group CO. Samples from group CA did not show differences when compared to group CO. Mass spectrometry showed the protein content from SDS-PAGE electrophoretic bands. Relative quantitative analysis showed differences among groups in bands of high, middle and low molecular weights, as well in their proteins. This study concludes that there are differences in the proteomic composition of saliva from adolescents with active caries lesions when compared to persons with no active caries lesions, mainly considering initial active caries lesions.
 
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Data de Publicação
2016-11-21
 
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