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Tesis Doctoral
DOI
Documento
Autor
Nombre completo
Paola Daniela Hidalgo Araujo
Dirección Electrónica
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2018
Director
Tribunal
Gavini, Giulio (Presidente)
Adde, Carlos Alberto
Chavez, Victor Elias Arana
Iglecias, Elaine Faga
Título en portugués
Expressão gênica de BMPR1, BMPR2 e TGFBR1 liberados de discos de dentina humana tratados com diferentes soluções desmineralizantes e adesão das células da papila apical cultivadas
Palabras clave en portugués
Endodontia
Expressão gênica
Papila dentária
Resumen en portugués
O sucesso dos procedimentos endodônticos regenerativos depende da adequada descontaminação do espaço endodôntico, da presença de células mesenquimais indiferenciadas, da liberação de fatores de crescimento que atuam como moléculas sinalizadoras para atração, proliferação, diferenciação celular e da presença de um "scaffold" que propicia suporte para a organização e vascularização do tecido neoformado. Os protocolos de regeneração pulpar têm utilizado o EDTA (ácido etileno-diamino-tetracético) para remover o smear layer e liberar fatores de crescimento presentes na matriz dentinária. Poucos estudos analisaram se a utilização de soluções quelantes específicas para o cálcio ou menos agressivas, apresentam melhores resultados na liberação de fatores de crescimento e na adesão das células da papila apical à superfície dentinária. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão gênica de BMPR1, BMPR2 e TGFBR1 liberados de discos de dentina humana previamente tratados com EDTA, EGTA e Ácido Cítrico e a adesão das células da papila apical à esses discos. Foram utilizadas células criopreservadas do biorrepositório de células do Laboratório de Biologia Básica do Departamento de Dentística da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo. Os discos de dentina foram obtidos da porção radicular interna de pré-molares e terceiros molares hígidos, humanos, que foram obtidos do Biobanco da FOUSP - Divisão de Dentes Humanos. Após a imersão por 1 minuro nas soluções desmineralizantes, os discos de detina foram transferidos para placas com 90 poços e as células foram plaqueadas. A adesão celular foi avaliada após 48 horas empregando-se a Microscopia Eletrônica de Varedura. Determinou-se a expressão gênica após os períodos de 07 e 21 dias de cultivo celular. A análise estatística foi realizada por meio da análise de variância a 1 critério (ANOVA) seguida de pós teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Aos 21 dias o tratamento da dentina com EGTA resultou em significativo aumento da BMPR1, comparado com PBS. Nenhuma condição experimental alterou a expressão de BMPR2. A expressão da TGBR1 aos 21 dias foi significativamente aumentada pelo tratamento prévio dos discos com EGTA. Embora não tenha ocorrido distribuição uniforme de células ao longo dos discos, foi observada adesão celular em todos os grupos experimentais. Conclui-se que o tipo de solução desmineralizante interfere na quantidade liberada dos fatores de crescimento BMPR1 e TGFBR1, presentes na dentina humana, não interferindo na adesão das células da papila apical na superfície dentinária.
Título en inglés
Gene expression of BMPR1, BMPR2 and TGFBR1 released from human dentin disks treated with different demineralizing solutions and adhesion of cultured apical papilla cells
Palabras clave en inglés
Dental papila
Endodontics
Gene Expression
Resumen en inglés
The success of regenerative endodontic procedures depends on the proper disinfection of the root canal, the presence of undifferentiated mesenchymal cells, the release of growth factors that act as signaling molecules for attraction, proliferation, cell differentiation and the presence of a scaffold that provides support for the organization and vascularization of neoformed tissue. Pulp regeneration protocols have used EDTA to remove the smear layer and release growth factors present in the dentin matrix. A few studies have analyzed whether the use of calcium-specific chelating or less aggressive solutions have better results in the release of growth factors and the adhesion of apical papilla cells to the dentin surface. The objective of this study was to evaluate the gene expression of BMPR1, BMPR2 and TGFBR1 released from human dentin disks previously treated with EDTA, EGTA and Citric Acid and the adhesion of apical papilla cells to these disks. Cryopreserved cells from the cell biorepository of the Basic Biology Laboratory of the Department of Dentistry of the Faculty of Dentistry of the University of São Paulo were used. Dentin discs were obtained from the inner root portion of premolars and human third molars that were obtained from the Biobank of the Human Tooth Division (FOUSP). After 1 min immersion in the demineralizing solutions the discs were transferred to plaques and the cells were plated. The cell adhesion was evaluated after 48 hours using the Scanning Electron Microscopy. Gene expression was determined after the periods of 7 and 21 days of cell culture. Statistical analysis was performed by analysis of variance at 1 criterion (ANOVA) followed by Tukey test post, with a significance level of 5%. At 21 days treatment of dentin with EGTA resulted in a significant increase of BMPR1 compared to PBS. No experimental condition altered BMPR2 expression. The expression of TGBR1 at 21 days was significantly increased by pretreatment of the EGTA discs. Although there was no uniform distribution of cells along the discs, cell adhesion was observed in all experimental groups. It is concluded that the type of demineralizing solution interferes with the released amount of the BMPR1 and TGFBR1 growth factors present in the human dentin, not interfering in the adhesion of apical papilla cells to the dentinal surface.
 
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Fecha de Publicación
2019-11-05
 
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