O glioblastoma multiforme (GB) é um tumor composto por células da glia, sendo o tipo de glioma mais comum e maligno, com altas taxas de recorrência e mortalidade. Adicionalmente, certos aspectos do GB dificultam a sua remoção cirúrgica completa, como o fato de crescer em regiões do cérebro de difícil acesso e seu padrão de crescimento difuso, sem bordas definidas. Estudos têm demonstrado que o GB é mantido por uma subpopulação semelhante a células-tronco denominadas células-tronco de glioblastoma (CTGs). Essas células se autorrenovam, promovem a angiogênese e a invasão e também são quimio e radiorresistentes. Assim, CTGs têm potencial significativo como um alvo terapêutico para o tratamento de glioblastomas. Estudos recentes têm mostrado que a proteína prion celular (PrP^C) surge como um fator chave na manutenção do GB e CTGs. A PrP^C tem um papel importante como uma scaffold protein sendo capaz de interagir com várias outras proteínas de membrana e matriz extracelular, formando complexos capazes de regular diferentes funções da biologia tumoral. Nesse estudo geramos células U87 e U251 nocautes (KO) para PrP^C através do método CRISPR-Cas9, que são cultivadas em duas condições distintas, a de monocamada (2D), e a de neuroesfera (3D), a qual é enriquecida com marcadores de CTGs. Nossos estudos indicam que PrP^C é capaz de regular a expressão e localização de CD44, assim como a expressão de EGFR em células U87. Ademais, ensaios de citometria de fluxo demostram que outras proteínas de membrana, como NOTCH1, integrina 6 e CD133, apresentam redução da expressão na superfície celular de células KO quando comparamos com células WT. Dados de transcriptoma de células KO aqui descritos reforçam o papel de PrP^C na modulação da biologia do GB, sendo capaz de modular genes relacionados a proliferação, stemness e migração celular. De fato, ensaios funcionais corroboram esses dados, demonstrando que a perda de PrP^C leva a uma diminuição na proliferação, autorrenovação e migração em GB. Sendo assim, os resultados aqui descritos reforçam o papel de PrP^C como uma proteína-chave na manutenção do GB e CTGs, e com um potencial terapêutico.

Glioblastoma multiforme (GB) is a tumor composed of glial cells, being the most common and malignant type of glioma, with high rates of recurrence and mortality. In addition, certain aspects of GB make its complete physiological removal difficult, such as the fact that it grows in regions of the brain that are difficult to access and its diffuse growth pattern, without determined borders. Studies have shown that GB is maintained by a stem cell-like subpopulation called glioblastoma stem cells (GSCs). These cells self-renew, promote angiogenesis and invasion, and are also chemo- and radio-resistant. Thus, GSCs have significant potential as a therapeutic target for the treatment of glioblastomas. Recent studies have shown that cellular prion protein (PrP^C) emerges as a key factor in the maintenance of GB and CTGs. PrP^C has an important role as a scaffold protein being able to interact with various membrane and extracellular matrix proteins, forming complexes capable of regular functions different from tumor biology. In this study, we generated PrP^C knockout (KO) U87 and U251 cells using the CRISPR-Cas9 method, which are cultured in two different conditions, the monolayer (2D) and the neurosphere (3D), which is enriched with markers of GSCs. Our studies indicate that PrP^C is able to regulate CD44 expression and localization, as well as EGFR expression in U87 cells. Furthermore, flow cytometry assays demonstrate that other membrane proteins, such as NOTCH1, 6 integrin and CD133, have reduced expression on the cell surface of KO cells when compared to WT cells. KO cell transcriptome data here reinforce the role of PrP^C in modulating GB biology, being able to modulate genes related to cell anticipation, stemness and migration. Indeed, functional assays corroborate these data, demonstrating that the loss of PrP^C leads to a decrease in preference, self-renewal and migration in GB. Therefore, the results seen here reinforce the role of PrP^C as a key protein in the maintenance of GB and GSCs, and with therapeutic potential.