O β-Sitosterol (βSito) é o fitoesterol mais abundante encontrado em plantas e alimentos enriquecidos com fitoesterol. Seu consumo tem aumentado devido a sua capacidade de reduzir o risco de doenças cardiovasculares ao inibir a absorção do colesterol. Porém, o βSito é propenso à oxidação por espécies reativas de oxigênio, como o ozônio, gerando oxifitoesteróis. É necessário compreender os efeitos biológicos e os mecanismos de ação desses compostos, uma vez que seus efeitos na saúde humana permanecem controversos. Considerando o metabolismo hepático desses esteróis, conduzimos um estudo para investigar os efeitos do βSito e do seu principal oxifitosterol β-Secosterol (βSec), produzido por oxidação pelo ozônio, na viabilidade celular, distribuição do ciclo celular, morfologia celular, organização do citoesqueleto e adesão focal nas linhagens BRL-3A (células de fígado imortalizadas de R.norvegicus) e HTC (hepatoma de rato). Para isso, empregamos as técnicas de MTT, exclusão por azul de tripano e dupla marcação com Hoechst 33342 e iodeto de propídeo para medir a viabilidade celular; técnica de citometria de fluxo para avaliar a progressão do ciclo celular; marcadores e corantes fluorescentes para analisar a morfologia celular e adesão focal. Nossos resultados demonstraram que βSito não provocou efeitos significativos nas duas linhagens celulares, enquanto βSec causou danos em ambas. Entretanto, as células tumorais se mostraram mais sensíveis ao oxifitoesterol em relação às não tumorais, uma vez que foi necessária uma menor concentração para observar seus efeitos. Nas células BRL-3A e HTC, βSec provocou diminuição na viabilidade celular, induziu parada do ciclo celular em fase G0/G1, causou alterações morfológicas e na organização do citoesqueleto e modificações na distribuição da vinculina presente em adesões focais. Estes efeitos se mostraram reversíveis, uma vez que as células se recuperaram dos danos sofridos após a remoção do composto. Entretanto, observamos que apenas a morfologia celular de células BRL-3A mantiveram alterações. Deste modo, nossos resultados demonstraram possíveis efeitos celulares induzidos por βSito e βSec, essenciais para melhor compreender potenciais ações benéficas ou adversas relacionadas aos seus usos terapêuticos.

β-Sitosterol (βSito) is the most abundant phytosterol in plants and phytosterol-enriched foods. Its consumption has increased due to its ability to reduce the risk of cardiovascular diseases by inhibiting cholesterol absorption. However, βSito is prone to oxidation by reactive oxygen species, such as ozone, generating oxyphytosterols. It is necessary to understand the biological effects and mechanisms of action of these compounds, as their impact on human health remains controversial. Considering the hepatic metabolism of these sterols, we conducted a study to investigate the effects of βSito and its main oxyphytosterol β-Secosterol (βSec), produced by ozone oxidation, on cell viability, cell cycle distribution, cell morphology, focal adhesion in BRL-3A (immortalized liver cells of R.norvegicus) and HTC (rat hepatoma) cell lines. For this, we used the techniques of MTT, trypan blue exclusion, and double labeling with Hoechst 33342 and propidium iodide to measure cell viability; flow cytometry technique to assess cell cycle progression; and fluorescent markers to analyze cellular morphology and focal adhesion. Our results demonstrated that βSito did not cause significant effects either in BRL-3A or in HTC cells while βSec caused damage in both cell lines. However, tumor cells were more sensitive to oxyphytosterol compared with non-tumor cells since a lower concentration was needed to observe its effects. In BRL-3A and HTC cells, βSec caused a decrease in cell viability, induced cell cycle arrest in the G0/G1 phase, and caused morphological alterations, and changes in the organization of the cytoskeleton and in the distribution of vinculin present in focal adhesions. These effects proved reversible, as the cells recovered from the damage suffered after the compound was removed. However, we observed that only the cellular morphology of BRL-3A cells maintained the alterations. Thus, our results demonstrated possible cellular effects induced by βSito and βSec, essential to understanding potential beneficial or adverse actions related to their therapeutic uses.