Staphylococcus aureus é uma bacteria que pode causar infecções severas, cujos sintomas variam de lesões na pele até quadros graves como endocardite, pneumonia e meningite. Diversas cepas desenvolveram multirresistência devido ao uso indevido de antibióticos e se tornaram um grande problema de saúde pública, não restrito apenas ao ambiente hospitalar. Novos tratamentos são necessários e o metabolismo do ácido lipóico em S. aureus parece ser um alvo promissor para o desenvolvimento de fármacos. O ácido lipóico é um cofator essencial dos complexos -cetoácido desidrogenase. S. aureus pode sintetizar ácido lipóico a partir do metabolismo de ácidos graxos e também pode captar ácido lipóico disponível no ambiente, de maneira distinta das células de mamíferos. Neste trabalho, as enzimas LplA1, LplA2, LipA e LipL; e seus substratos, GcvH e E2-PDH, foram clonados e expressos em Escherichia coli. Proteínas solúveis foram purificadas e utilizadas em ensaios enzimáticos ou ensaios de cristalização. Usamos uma metodologia baseada em western blot para triagem qualitativa dos possíveis inibidores da LplA1. Este método também pode ser aplicado à LplA2. Este trabalho deu os passos iniciais na busca de novos compostos, que esperamos que no futuro possam ser usados como antibióticos para combater este patógeno.

Staphylococcus aureus is a commensal bacterium that can lead to severe infections, whose symptoms varies from skin lesions up to serious conditions like endocarditis, pneumonia and meningitis. Several strains have developed multidrug resistance due to antibiotic misuse and became a major public health problem and not solely restricted to the hospital environment. Novel treatments are urgently needed and the metabolism of lipoic acid in S. aureus appears to be a promising target for drug discovery. Lipoic acid is an essential cofactor of the -keto acid dehydrogenase complexes. S. aureus can synthetize lipoic acid from the fatty acid synthesis pathway, and can also salvage lipoic acid from the environment, in a distinct way from the mammalian cells. In this work, the enzymes involved in this pathway, LplA1, LplA2, LipA and LipL; and their substrates, GcvH and E2-PDH, were cloned and expressed in Escherichia coli. Soluble proteins were purified, and used in enzymatic assays or crystallization assays. We used a qualitative screening based on western blot to test inhibitors against LplA1. This method can also be applied to LplA2. This work gave the initial steps in search of new compounds, which we hope in the future can be used as antibiotics to fight this pathogen and relieve its burden.