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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.42.2019.tde-07022019-174352
Documento
Autor
Nome completo
Denicar Lina Nascimento Fabris Maeda
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2018
Orientador
Banca examinadora
Ferreira, Luis Carlos de Souza (Presidente)
Botosso, Viviane Fongaro
Miyaji, Eliane Namie
Quintilio, Wagner
Título em português
Identificação de epítopos presentes na proteína e do vírus dengue tipo 2 (DENV2) capazes de gerar anticorpos neutralizantes sem a promoção da exacerbação da replicação viral.
Palavras-chave em português
Adjuvantes
Anticorpos
Dengue
Neutralização
Proteína de envelope
Resumo em português
A dengue é uma doença causada por um dos quatro sorotipos de vírus da dengue (DENV 1-4), e representa a principal arbovirose que atualmente atinge seres humanos. Dentre as maiores dificuldades para o desenvolvimento de uma vacina eficaz contra o DENV, correlaciona-se a falta de conhecimento mais preciso sobre os epítopos presentes na superfície do vírus, responsáveis para indução de anticorpos neutralizantes sem promoverem a exacerbação da infecção viral. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi identificar epítopos presentes na superfície do DENV2 capazes de gerar anticorpos neutralizantes sem promover a amplificação viral frente a células que expressem receptores FcR. Avaliamos também a influência dos adjuvantes (LT, LT-K63 e LTB), na modulação da resposta de anticorpos para epítopos presentes nos domínios I, II e III da proteína de envelope do DENV2. Observamos que a administração das LTs como adjuvantes proporcionaram a potencialização da resposta de anticorpos IgG EDI/II ou EDIII-específicos nos animais imunizados, em relação aos outros grupos vacinais. Em relação à qualidade da resposta humoral proporcionada pelas imunizações, os anticorpos antígeno-específicos gerados com LT, LT-K63 ou LTB apresentaram maior capacidade de neutralização viral em comparação com aqueles obtidos dos demais grupos vacinais. Demonstramos de forma inédita através da análise de imunoassinatura dos anticorpos IgG EDIII-específicos, que a administração de LT e LTB como adjuvante vacinal, permitiu a identificação de um epítopo localizado na alça EF e FG da proteína EDIII de DENV2. Além disso, por meio da utilização de um peptídeo 47 contendo a sequência correspondente ao epítopo identificado, foi capaz de inibir a infecção do DENV2, tão bem quanto, a proteína EDIII em ensaios in vitro. Podemos perceber, que a utilização do adjuvante LT e seu derivado atóxico LTB em formulações vacinais, possibilitaram a modulação de anticorpos capazes de reconhecer epítopos presentes no EDIII, importantes para a neutralização viral. Esses resultados, permitem o desenvolvimento de novos antígenos alvos para estratégias vacinas voltadas para o controle dos DENV.
Título em inglês
Identification of epitopes present in the E protein of dengue virus type 2 (DENV2) capable of generating neutralizing antibodies without causing exacerbation of viral replication.
Palavras-chave em inglês
Adjuvants
Antibodies
Dengue
Envelope protein
Neutralization
Resumo em inglês
Dengue is a disease caused by one of four dengue virus serotypes (DENV 1-4), represents the main arbovirose that currently affects humans. Among the greatest difficulties for the development of effective vaccine against DENV is the lack of more precise knowledge about the epitopes present at the surface of the virus, responsible for the induction of neutralizing antibodies without promoting the exacerbation of viral infection. Thus, the objective of the present work was to identify epitopes present on the surface of DENV2 capable of generating neutralizing antibodies without promoting viral amplification against cells expressing the FcR receptors. We also evaluated the influence of adjuvants (LT, LT-K63 and LTB) on the modulation of the antibody response to epitopes present in domains I, II and III in envelope protein of DENV2. We have observed that administration of LTs as adjuvants provided potentialization of the antibodies response IgG EDI/II or EDIII-specific in the immunized animals, relative to the other vaccine groups. Regarding the quality of the humoral response provided by the immunizations, the antigen-specific antibodies generated with LT, LT-K63 or LTB presented higher viral neutralization capacity compared to those obtained from the other vaccine groups. We demonstrated through the immunoassay analysis of EDIII-specific IgG antibodies that the administration of LT and LTB as a vaccine adjuvant allowed the identification of an epitope located in the EF and FG loop of the EDIII protein of DENV2. Furthermore, by using a peptide 47 containing the sequence corresponding to the identified epitope, was able to inhibit DENV2 infection as well as the EDIII protein in vitro assays. It can be seen that the use of the LT adjuvant and its non-toxic derivative LTB in vaccine formulations enabled the modulation of antibodies capable of recognizing epitopes present in EDIII, which are important for viral neutralization. These results allow the development of new target antigens for vaccine strategies aimed at the control of DENV.
 
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Data de Liberação
2021-02-06
Data de Publicação
2019-02-08
 
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