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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.42.2012.tde-23042013-093744
Documento
Autor
Nome completo
Fabiana Morandi Jordão
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2012
Orientador
Banca examinadora
Katzin, Alejandro Miguel (Presidente)
Cravo, Pedro Vitor Lemos
Daffre, Sirlei
Terra, Clelia Ferreira
Thiemann, Otavio Henrique
Título em português
Caracterização da enzima bifuncional farnesil difosfato/geranilgeranil difosfato sintase e efeito do risedronato nos estágios intraeritrocitários de Plasmodium falciparum.
Palavras-chave em português
Plasmodium
Antimaláricos
Malária
Resistência microbiana às drogas
Resumo em português
O aumento da resistência do parasita da malária a maioria da drogas antimaláricas disponíveis, tornandose necessário pesquisar novos compostos com potencial atividade antimalárica. O objetivo desta tese foi inicialmente caracterizar a atividade do risedronato contra as formas intraeritrocitárias do parasita in vivo, além de identificar seu possível mecanismo de ação. A IC50 do risedronato foi de 20 mM em culturas de Plasmodium falciparum. Risedronato reduziu a biossíntese de FOH e GGOH e a isoprenilação de proteínas, inibindo a transferência do grupo FPP para as proteínas farnesiladas, entretanto, a transferência do GGPP para as proteínas geranilgeraniladas não foi inibida, isto também ocorreu quando proteínas ras e rab foram analisadas, sugerindo que a droga está inibindo a enzima FPPS. A enzima FPPS de P. falciparum foi expressa e obtivemos uma proteína recombinante fusionada a GST (rPfFPPS). Os substratos IPP, DMAPP, GPP e FPP foram utilizados para determinação da atividade catalítica da enzima, demonstrando FPP e GGPP como principais produtos. Os valores de Km para os diferentes substratos foi determinado. Demonstramos também que rPfFPPS é inibida por risedronato, podendo ser explorado como potencial alvo antimalárico.
Título em inglês
Characterization of the bifunctional enzyme farnesyl diphosphate/geranylgeranyl diphosphate synthase and effect of risedronate intraerythrocytic stages of Plasmodium falciparum.
Palavras-chave em inglês
Plasmodium
Antimalarial
Malaria
Microbial resistance to drugs
Resumo em inglês
The increased resistance of the malaria parasite most of antimalarial drugs are available, making it necessary to search for new compounds with potential antimalarial activity. The aim of this thesis was initially characterize the activity of risedronate against intraerythrocytic forms of the parasite in vivo, and identify its possible mechanism of action. The IC50 of risedronate was 20 mM in cultures of Plasmodium falciparum. Risedronate reduced biosynthesis and FOH, GGOH and protein isoprenylation, inhibiting the transfer of FPP group for farnesylated proteins, however, the transfer of GGPP to geranygeranylated proteins was not inhibited, this also occurred when ras and rab proteins were analyzed, suggesting that the drug is inhibiting the enzyme FPPS. The FPPS enzyme from P. falciparum was expressed and obtained a recombinant protein fused to GST (rPfFPPS). The substrates IPP, DMAPP, GPP and FPP were used to determine the catalytic activity of the enzyme, demonstrating FPP and GGPP as main products. The Km values for the various substrates were determined. We also demonstrate that rPfFPPS is inhibited by risedronate, which can be exploited as potential antimalarial target.
 
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Data de Publicação
2013-05-29
 
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