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Thèse de Doctorat
DOI
10.11606/T.46.2019.tde-23012019-100954
Document
Auteur
Nom complet
Luciano Gomes Fietto
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2001
Directeur
Jury
Gomes, Suely Lopes (Président)
Lodi, Wilson Roberto Navega
Silveira Filho, José Franco da
Sogayar, Mari Cleide
Verjovski-Almeida, Sergio
Titre en portugais
Caracterização e expressão de dois genes codificando ATPases do tipo P em Blastocladiella emersonii
Mots-clés en portugais
ATPase tipo P
Biologia molecular
Blastocladiella
Microbiologia
Microrganismos
Resumé en portugais
A TPases do tipo P são proteínas integrais de membrana que usam a energia química contida na molécula de ATP para o transporte de cátions através de membranas. O nosso trabalho apresenta a clonagem e o sequenciamento de um gene (BePAT2) e a caracterização da expressão de dois genes (BePAT1 e BePAT2) codificando isoformas de uma ATPase do tipo P no fungo aquático Blastocladiella emersonii. As proteínas codificadas por estes genes, surpreendentemente se mostraram mais similares às Na+/K+ e H+/K+-ATPases de eucariotos superiores do que a outras ATPases de fungos. Experimentos de "Northern blot", imunoprecipitação e "Western blot" demonstraram que as ATPases (BePAT1 e BePAT2) são diferencialmente expressas durante o desenvolvimento de B. emersonii. Os resultados obtidos mostraram que o aumento da transcrição dos genes refletiu em um aumento da síntese e do acúmulo das ATPases, sugerindo um controle pré-traducional da expressão de BePAT1/2. Estudos de formação de fosfoenzima na presença de diferentes íons e inibidores, utilizando as enzimas imunopurificadas, sugerem que as proteínas codificadas por estes genes tenham uma atividade semelhante às Na+/K+-ATPases. Os nossos resultados de expressão e atividade mostram pela primeira vez, evidências da funcionalidade de genes codificando uma proteína similar às Na+/K+-ATPases em um eucarioto inferior.
Titre en anglais
Characterization and expression of two genes encoding P-type ATPases in Blastocladiella emersonii
Mots-clés en anglais
Blastocladiella
Microbiology
Microorganisms
Molecular biology
P-type ATPase
Resumé en anglais
P- type A TPases are integral membrane proteins which use the energy stored in the A TP molecule to drive the transport of cations through biological membranes. In this work we report the cloning and sequencing of the BePAT2 gene and the characterization and expression of two genes (BePAT1 and BePAT2) encoding isoforms of a P-Type ATPase in the aquatic fungus Blastocladiella emersonii. Surprisingly the putative BePAT1 and BePAT2 proteins are more similar to Na+/K+and H+/K+-ATPases from animal cells than to other P-type ATPases from fungi. Northern blot, immunoprecipitation and Western blot experiments demonstrated that these ATPases (BePAT1 and BePAT2) are developmentally regulated in B. emersonii. The results showed that the increase in the BePAT1/2 transcription reflects in an increase in the synthesis and accumulation of the proteins, suggesting a transcriptional control of the BePAT1/2 expression. Studies of phosphoenzyme formation using the immunopurified enzymes in the presence of different ions and inhibitors suggested a Na/K-ATPase like activity. Our results demonstrate for the first time biochemical evidences of functionality of genes encoding a Na+ /K+-ATPase like protein in an eucaryotic microorganism.
 
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Date de Publication
2019-01-23
 
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