• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Disertación de Maestría
DOI
Documento
Autor
Nombre completo
Jane Silveira de Oliveira
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2000
Director
Tribunal
Ho, Paulo Lee (Presidente)
Silva, Ana Claudia Rasera da
Winter, Carlos Eduardo
Título en portugués
Clonagem e expressão de uma potencial α-neurotoxina de cobra coral Micrurus corallinus em Escherichia coli
Palabras clave en portugués
Biologia molecular
Resumen en portugués
A seqüência nxh1 foi isolada a partir de uma biblioteca de cDNA da glândula de veneno da cobra coral Micrurus corallinus. Essa sequência apresenta similaridade estrutural com as toxinas de "três dígitos", e principalmente com as α-neurotoxinas, devendo apresentar 4 pontes dissulfeto deduzidas por comparação com outras proteínas desta família. Porém, essa potencial toxina não possui alguns aminoácidos importantes para a interação com o receptor nicotínico de acetilcolina na junção neuromuscular. A potencial toxina NXH1 foi expressa em E. coli de 3 maneiras distintas. Os melhores resultados foram obtidos quando a NXH1 foi expressa em fusão com uma cauda de histidina. Essa construção permitiu uma rápida e eficiente purificação da proteína recombinante. A proteína de fusão foi usada para a produção de um soro específico anti-NXH1. O soro anti-proteína recombinante, assim como o soro do Instituto Butantan, reconheceu a toxina recombinante em Western blot e ELISA. Além disso, o anti-NXH1 reconheceu em Western blot apenas uma banda presente no veneno de M. corallinus, mas não reconheceu os venenos de outras 10 espécies de Micrurus. Experimentos de ligação mostraram que componentes do veneno de M. corallinus ligam-se aos receptores nicotínicos das membranas de músculo de rato. O soro anti-NXH1 não inibiu a ligação do veneno aos receptores, indicando que, ou a NXH1 não é uma α-neurotoxina, ou o antisoro não consegue impedir a ligação da toxina nativa ao receptor, ou que existem outras a-neurotoxinas do veneno que não são bloqueadas pelo soro anti-NXH1.
Título en inglés
Cloning and expression of a potential coral snake α-neurotoxin Micrurus corallines in Escherichia coli
Palabras clave en inglés
Molecular biology
Resumen en inglés
The nxh1 sequence has been isolated from a cDNA library from the coral snake Micrurus corallinus' venom gland. The deduced protein is highly similar to known "three finger" α-neurotoxins, with four deduced disulfide bridges. However, the predicted protein lacks some important amino acids for the nicotinic acetylcholine receptor interaction. The potencial toxin NXH1 was expressed in E. coli in three different ways. The best results were obtained when the protein was expressed as a His-tagged fusion protein, which allowed rapid and efficient purification of the recombinant toxin. The fusion protein was used to generate a specific antiserum against NXH1. The produced antiserum, as well as the serum from Instituto Butantan, recognized in ELISA and Western blot the recombinant toxin. Besides, the anti-NXH1 serum recognized in Western Blot a single band from the venom of M. corallines but not the venom from other 10 Micrurus species. Binding experiments showed that the components from M. corallines venom bind to nicotinic acetylcholine receptor in rat muscle membranes. The anti-NXH1 serum did not inhibited the binding of the venom to the receptors. It seems that NXH1 is not an α-neurotoxin, or that the antiserum does not inhibit the binding of the native toxin to the receptor, or that the antiserum is not capable to inhibit the action of other α-neurotoxin from the venom.
 
ADVERTENCIA - La consulta de este documento queda condicionada a la aceptación de las siguientes condiciones de uso:
Este documento es únicamente para usos privados enmarcados en actividades de investigación y docencia. No se autoriza su reproducción con finalidades de lucro. Esta reserva de derechos afecta tanto los datos del documento como a sus contenidos. En la utilización o cita de partes del documento es obligado indicar el nombre de la persona autora.
Fecha de Publicación
2019-05-31
 
ADVERTENCIA: Aprenda que son los trabajos derivados haciendo clic aquí.
Todos los derechos de la tesis/disertación pertenecen a los autores
CeTI-SC/STI
Biblioteca Digital de Tesis y Disertaciones de la USP. Copyright © 2001-2021. Todos los derechos reservados.