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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.46.2017.tde-31102016-085414
Documento
Autor
Nome completo
Joyce Suellen Coêlho Pires
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2016
Orientador
Banca examinadora
Ulrich, Henning (Presidente)
Quintilio, Wagner
Wrenger, Carsten
Título em português
Desenvolvimento de produto multiparamétrico para triagem pré-natal de anticorpos IgG contra doenças infecciosas
Palavras-chave em português
Ensaio multiparamétrico
Infecção congênita
Luminex
TORCH
Triagem pré-natal
Resumo em português
Infecção congênita é aquela transmitida da mãe ao feto antes do nascimento. A transmissão vertical pode ocorrer por via transplacentária ou por contato direto com o patógeno durante o parto. A fonte de infecção é o microrganismo presente no sangue da gestante durante a infecção primária ou crônica. Estima-se que as infecções perinatais representam 2% a 3% de todas anomalias congênitas e as mais comuns são representadas pela sigla TORCH, que inclui Toxoplasmose, Outras (como sífilis e varicela-zoster), Rubeóla, Citomegalovírus e Herpes. A maioria das infecções TORCH causa morbidade materna leve, assintomática, mas tem consequências fetais graves e, em geral, o tratamento da infecção materna não tem impacto sobre o resultado fetal. Por isso, o reconhecimento do contágio materno e o monitoramento fetal são de extrema importância na prevenção de doenças congênitas. O presente projeto visa o desenvolvimento de um produto multiparamétrico utilizando a tecnologia xMAP®, criada pela companhia norte-americana Luminex Corporation, para detecção simultânea de anticorpos da classe IgG anti-Toxoplasmose, anti-Rubéola e anti- Citomegalovírus em amostras de sangue coletado em papel de filtro. O produto, inédito no mercado nacional, tem o objetivo de atender à demanda específica da triagem pré-natal no país. Como objetivos específicos pode-se citar: a melhoria da eficiência dos programas de triagem pré-natal, graças à economia de tempo, amostras e reagentes; a contribuição financeira para o Brasil, uma vez que será produzido nacionalmente, gerando emprego e renda; a possibilidade de ampliar o mercado a partir do desenvolvimento futuro de novos produtos baseados na mesma metodologia. Para tanto, utilizaram-se antígenos específicos acoplados à microesferas de poliestireno e anticorpos de detecção conjugados à estreptavidina-ficoeritrina. Foram analisadas 1499 amostras de gestantes, coletadas em papel de filtro, cedidas e previamente triadas pela APAE-Goiânia, com o objetivo de comparar os resultados obtidos através da análise com o protótipo desenvolvido com aqueles já confirmados pelo laboratório utilizando a tradicional metodologia de ELISA. Os resultados de Concordância e Sensibilidade foram superiores a 78% para todos os parâmetros. Por outro lado, os valores de Especificidade foram mais baixos, principalmente para os parâmetros Rubéola e Citomegalovírus. Importante ressaltar o pequeno número de amostras com resultado negativo para Citomegalovírus e Rubéola disponível, o que refletiu diretamente no cálculo da Especificidade do produto
Título em inglês
Development of multiplex assay for prenatal screening of IgG antibodies against infectious diseases
Palavras-chave em inglês
Congenital infection
Luminex
Multiplex assay
Prenatal screening
TORCH
Resumo em inglês
Congenital infections are transmitted from the mother to the fetus before birth. Vertical transmission can occur via placenta or by direct contact with the pathogen during childbirth. The source of infection is the microorganism present in the pregnant woman's blood during primary or chronic infection. It is estimated that perinatal infections are responsible for 2% to 3% of all congenital abnormalities and the most common are represented by the acronym TORCH, including Toxoplasmosis, Others (such as syphilis and varicella-zoster), Rubella, Cytomegalovirus (CMV) and Herpes. Most infections TORCH causes mild maternal morbidity, asymptomatic, but has serious fetal consequences fetal and, generally, maternal infection treatment has no impact on fetal outcome. Therefore, the recognition of maternal infection and fetal monitoring are extremely important in preventing birth defects. This project aims to develop a product using the multiplex xMAP® technology, created by US company Luminex Corporation, for simultaneous detection of IgG antibodies anti-toxoplasmosis, antirubella and anti-cytomegalovirus in blood samples collected in filter paper. The product, unprecedented in brazilian market, aims to meet the specific demand of prenatal screening in Brazil. The specific objectives are: improving the efficiency of prenatal screening programs, thanks to savings in time, samples and reagents; the financial contribution for Brazil, as it will be produced nationally, generating jobs and income; the possibility of expanding the market from the future development of new products based on the same methodology. For this purpose, were used specific antigens coupled to polystyrene beads and antibodies conjugated to streptavidin-phycoerythrin. Were analyzed 1499 samples of pregnant women, collected on filter paper, pre-screened by APAE-Goiânia, in order to compare the results obtained from the analysis with the prototype developed with those already confirmed by the laboratory using traditional ELISA methodology. The results of Concordance and Sensitivity were higher than 78% for all parameters. In contrast, the Specificity values were lower, especially for Rubella and Cytomegalovirus parameters. Importantly the small number of negative samples negative for Cytomegalovirus and Rubella provided by APAE-Goiânia, which is directly reflected in the product specificity value.
 
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Data de Publicação
2017-02-17
 
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