Introdução: Concentrações sanguíneas de hidroxicloroquina (HCQ) são usadas para monitorizar a eficácia, segurança e aderência do paciente ao tratamento. O fluido oral surgiu como uma matriz alternativa não invasiva, de fácil acesso e de baixa complexidade para monitoramento de drogas terapêuticas. Entretanto, não existe um método analítico descrito para dosagem de HCQ no fluido oral. Portanto, desenvolvemos e validamos um método de cromatografia líquida de ultra desempenho acoplado a espectrometria de massa sequencial (UHPLC-MS/MS) para a análise das concentrações de HCQ e seus principais metabólitos em fluido oral e comparamos ao sangue total. Métodos: Para o preparo da amostra foram utilizados 10 microlitros das matrizes para precipitação de proteínas seguida de extração em fase sólida em linha. O processo de validação incluiu as avaliações do limite de quantificação, linearidade, precisão, recuperação, efeito matriz, arraste de amostra e critérios para diluição da amostra. Resultados: O limite de quantificação foi 50 ng/mL para HCQ e seus metabolitos no fluido oral e sangue total. A curva de calibração se mostrou linear entre 50 até 2000 ng/mL (r2 = 0.999). O coeficiente de variação para a precisão do ensaio foi de 1,2 a 9,7% para intra-ensaio e 1,1 a 14,2% para interensaio para ambos HCQ e seus metabolitos no fluido oral e sangue total em 150, 750 e 1250 ng/mL. A recuperação ficou entre 85,3 a 118,5 % para 150, 750 e 1250 ng/mL de HCQ e seus metabolitos no fluido oral e sangue total. Fator de diluição até 5 vezes foi validado para concentrações acima do limite superior de quantificação. Conclusões: O método validado se mostrou específico, preciso e com acurácia para determinar o intervalo analítico para monitorização terapêutica da HCQ e seus metabolitos no fluido oral e sangue total. Declaração de impacto: O artigo é sobre um novo método de LC-MS/MS para determinação da hidroxicloroquina e seus metabolitos no fluido oral e sangue total para monitorização terapêutica de drogas. O método foi desenvolvido e validado com sucesso. O método reportado é o primeiro a medir a hidroxicloquina e seus metabolitos em fluido oral. A quantidade de amostra necessária é a menor já reportada na literatura para fluido oral e sangue. O método seria benéfico no ambiente clínico onde a amostragem de sangue enfrenta limitações, particularmente nas populações pediátricas e idosa, e naqueles com fluido oral reduzido como os pacientes com síndrome Sjögren

Background: Hydroxychloroquine (HCQ) blood levels are used to monitor efficacy, safety, and patient adherence during treatment. Oral fluid has emerged as an alternative non-invasive, easily accessible, and low-complexity matrix for drug monitoring. However, there is no analytical method to measure HCQ in oral fluid. Therefore, we developed and validated an ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass (UHPLC-MS/MS) method for the measurement of HCQ and its main metabolites in oral fluid and compared to whole blood. Methods: Ten microliters of matrices were used for sample preparation by protein precipitation with acetonitrile followed by online solid phase extraction. The validation process included assessment of lower limit of quantification, linearity, precision, recovery, matrix effect, interferences assessment, carry over, and sample dilution validation. Results: The lower limit of quantification was 50 ng/mL for HCQ and metabolites in both oral fluid and whole blood. The calibration curve was linear from 50 to 2000 ng/mL (r2 = 0.999). The coefficient of variation for precision assay was 1.2 to 9.7% for intra-day and 1.1 to 14.2% for inter-day for both HCQ and metabolites in oral fluid and whole blood samples at 150, 750, and 1250 ng/mL. The recovery was 85.3 to 118.5 % for 150, 750, and 1250 ng/mL of HCQ and metabolites in both oral fluid and whole blood. Dilution factor up to 5-folds was validated for concentrations higher than the upper limit of quantification. Conclusions: The validated method is specific, precise, and accurate to determine analytical range for therapeutic monitoring of HCQ and its main metabolites in oral fluid and blood. Impact Statement: The article is about a new LC-MS/MS method for the measurement of hydroxychloroquine and its main metabolites in oral fluid and blood for therapeutic drug monitoring. The method was successfully developed and validated. The reported method is the first to measure hydroxychloroquine and metabolites in oral fluid. The amount of sample required is the lowest reported in the literature for both oral fluid and blood. The method would be beneficial in the clinical setting where blood sampling faces limitations, particularly in the pediatric and elderly population, and in those with reduced oral fluid such as Sjögren syndrome patients