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Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.5.2020.tde-28012020-132322
Documento
Autor
Nome completo
Thais Maria Pinheiro Callou
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2019
Orientador
Banca examinadora
Santo, Ruth Miyuki (Presidente)
Orfali, Raquel Leão
Sandrin, Leda das Neves Almeida
Sotto, Mirian Nacagami
Título em português
Análise da expressão das proteínas de barreira epitelial, filagrina e claudina-1, na superfície ocular de pacientes portadores de dermatite atópica
Palavras-chave em português
Claudina-1
Dermatite atópica
Epitélio
Filagrina
Imunofluorescência
Reação em cadeia da polimerase
Túnica conjuntiva
Resumo em português
Introdução: A dermatite atópica (DA) é uma doença inflamatória crônica, pruriginosa, que acomete crianças e adultos e apresenta alta prevalência mundial. Em geral, a DA está associada a manifestações extra-cutâneas de atopia como asma, rinite e manifestações oculares que podem acarretar danos visuais irreversíveis. A patogênese da DA é multifatorial, incluindo componentes ambientais, imunológicos, estruturais e genéticos. A diminuição das proteínas filagrina (FLG) e claudina-1 (CLD1) na barreira cutânea dos pacientes portadores de DA é um dos principais fatores estruturais envolvidos na gênese da doença. É possível que a alteração dessas proteínas na superfície ocular de pacientes portadores de DA possa contribuir para a gênese das alterações oculares. Objetivos: Avaliar o perfil das proteínas FLG e CLD1 e determinar a expressão do RNA-m para seus genes na superfície ocular dos pacientes portadores de DA, e correlacionar os resultados com o quadro clínico ocular, sintomas e gravidade da doença. Métodos: Células da conjuntiva bulbar dos pacientes foram coletadas por citologia de impressão e avaliadas pelas técnicas de imunofluorescência (IF) e reação em cadeia de polimerase (RT-PCR). Resultados: Detectamos aumento da expressão da FLG e da CLD1, bem como dos seus níveis de transcritos de RNAm na superfície ocular nos pacientes com DA comparados aos controles. Houve correlação negativa com a coloração com fluoresceína e correlação positiva e significativa entre a expressão da FLG e o TRFL. Conclusões: No presente estudo, as células epiteliais conjuntivais de pacientes com DA apresentaram expressão aumentada de FLG e CLD1, tanto na IF quanto no RT-PCR, em contraste com os achados cutâneos relacionados. Nossos resultados podem refletir uma resposta protetora da superfície ocular à inflamação ocular relacionada à DA e à doença do olho seco associada. Também detectamos FLG na conjuntiva de indivíduos saudáveis, um achado sem precedentes. Investigações adicionais com enfoque no papel da FLG, CLD1 e outras proteínas epiteliais na superfície ocular de pacientes com DA podem esclarecer a fisiopatologia da doença e ajudar a desenvolver terapias eficazes
Título em inglês
Analysis of epithelial barrier proteins expression, filaggrin and claudin-1, on the ocular surface of patients with atopic dermatitis
Palavras-chave em inglês
Claudin-1
Conjunctiva
Dermatitis atopic
Epithelium
Filaggrin
Immunofluorescence
Polymerase chain reaction
Resumo em inglês
Background: Atopic dermatitis (AD) is a chronic, itchy inflammatory disease that affects children and adults and presents a high global prevalence. In general, AD is associated with extra-cutaneous manifestations of atopy such as asthma, rhinitis and ocular involvement that can lead to irreversible visual damage. The pathogenesis of AD is multifactorial, including environmental, immunological, structural and genetic components. The reduction of filaggrin (FLG) and claudin-1 (CLD1) proteins in the cutaneous barrier of patients with AD is one of the main structural factors involved in the genesis of the disease. It is possible that the alteration of these proteins in the ocular surface of patients with AD may contribute to the genesis of ocular involvement. Purpose: To evaluate FLG and CLD1 profiles and determine mRNA expression for their genes on the ocular surface of AD patients, correlating the results with the ocular findings, symptoms and disease severity. Methods: Impression cytology was performed on the patients' bulbar conjunctiva for cellular collection and subsequent evaluation through immunofluorescence (IF) and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) techniques. Results: We detected increased expression of FLG and CLD1, as well as their transcript levels in AD patients compared to controls. There was a negative correlation with fluorescein staining and positive and significant correlation between TBUT and FLG expression. Conclusions: In the present study, conjunctival epithelial cells of AD patients showed an increased expression of FLG and CLD1, on both IF and RT-PCR, in contrast to related cutaneous findings. Our results may reflect a protective response of the ocular surface to AD-related ocular inflammation and associated dry eye disease. We also detected FLG in the conjunctiva of healthy individuals, an unprecedented finding. Further investigations focusing the role of FLG, CLD1 and other epithelial proteins in ocular surface of AD patients may clarify the pathophysiology of the disease and help develop effective therapies
 
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Data de Publicação
2020-01-28
 
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