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Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.5.2017.tde-09032017-121951
Document
Author
Full name
Renata de Castro Gonçalves
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2016
Supervisor
Committee
Fernandes, Denise de Castro (President)
Alaniz, Miriam Helena Fonseca
Demasi, Marilene
Title in Portuguese
A ativação da NADPH oxidase mediada pela superexpressão da Dissulfeto Isomerase proteica em células musculares lisas vasculares
Keywords in Portuguese
Aberrações cromossômicas
Aneuploidia
Diagnóstico pré-natal
Fluorescência
Instabilidade cromossômica
Reação em cadeia da polimerase
Abstract in Portuguese
O fenótipo das células musculares lisas vasculares (VSMC) depende de fatores instrínsecos e extrínsecos, que incluem a sinalização redox dependente da NADPH oxidase (NOX). A expressão / atividade da Nox1 estimuladas por fatores de crescimento é regulada pela chaperona oxidoredutase dissultefo isomerase proteica (PDI). A PDI é necessária para a migração de VSMC e organização de seu citoesqueleto, e a PDI extracelular contrabalanceia o remodelamento constritivo vascular por reorganização do citoesqueleto. Tal padrão efeitos da PDI nos levou à hipótese de que a PDI poderia orquestrar alterações fenotípicas das VSMC, e para testálas desenvolvemos VSMC que superexpressam PDI de forma induzível por tratamento com doxiciclina (VSMC- PDIteton ). Observamos que a superexpressão de PDI prolongada (por 72h) aumenta o comprimento celular e induz a expressão de marcadores de diferenciação calponina, ?-actina, e smoothelina, cujo aumento foi inibido após a incubação com catalase. A produção de superóxido intracelular aumentou após 48h de superexpressão de PDI, produzido parcialmente pela Nox1, conforme inibição por GKT136901 ou peptídeo NOXA1ds. Em curto prazo, a superexpressão da PDI (40h) aumentou a distância percorrida em ensaio de migração de célula única. Finalmente, o silenciamento da PDI em VSMC diminuiu espontaneamente a expressão do marcador de diferenciação (calponina). Estes dados sugerem que a superexpressão de PDI induz ativação da NADPH oxidase transientemente e que provavelmente a principal isoforma responsável seja a Nox1, enquanto que a superexpressão de PDI sustentada induz alteração no fenótipo de VSMC
Title in English
Validation of quantitative fluorescent polymerase chain reaction (QF-PCR) test to detect fetal aneuploidies
Keywords in English
Aneuploidy
Chomosomal instability
Chromosome aberrations
Fluorescence
Polymerase chain reaction
Prenatal diagnosis
Abstract in English
Vascular smooth muscle cell (VSMC) phenotype switch depends on extrinsic/ intrinsic cues including NADPH oxidase (Nox) - dependent redox signalling. Growth factor- triggered Nox1 expression/ activity is regulated by the chaperone oxidoreductase protein disulphide isomerase- A1 (PDI). PDI is required for VSMC migration and cytoskeleton organization, and extracellular PDI counteracts constrictive vascular remodelling via cytoskeleton reshaping. Such pattern of PDI effects led us to hypothesize that PDI may oschestrate VSMC phenotypic alterations, and test it we developed VSMC which overexpress PDI by doxyxycline treatment (VSMC-PDIteton) . We observed that sustained PDI overexpression (72h) increased cell length and induced the expression of differentiation markers calponin, ?-actin and smoothelin, which were not further upregulated upon catalase incubation. Intracelular superoxide production increased alter 48h of PDI overexpression, produced partially from Nox1, based on inhibiton with GKT136901 or NOXA1ds peptide. Acute PDI overexpression (40h) increased VSMC distance during single cell migration assay. Finally, PDI silencing spontaneously decreased differentiation marker calponin expression. These data suggest that PDI overexpression induces transiently NADPH oxidase overexpression and probably the major isoform is Nox1, while sustained PDI overexpression indices VSMC phenotypic changes
 
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Publishing Date
2017-03-09
 
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