Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.5.2023.tde-31072023-144211
Document
Author
Full name
Ádilla Latielle Abelha de Santana
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2023
Supervisor
Committee
Carvalho, Luciani Renata Silveira de (President)
Domenice, Sorahia
Oliveira, Diogo Losch de
Silva, Ives Charlie da
Title in Portuguese
Caracterização fenotípica do zebrafish (Danio rerio) portador de knockout no gene prop1 gerado pela técnica de edição genômica CRISPR/Cas9 na fase adulta
Keywords in Portuguese
Fertilidade
Hipófise
Hipopituitarismo
Peixe-zebra
Proteína 9 associada à CRISPR
Abstract in Portuguese
Hipopituitarismo congênito é definido como a deficiência de um ou mais hormônios da hipófise e pode ocorrer devido a mutações em fatores de transcrição envolvidos na embriogênese hipofisária. Em humanos, as variantes alélicas patogênicas no PROP1 são a causa mais comum de hipopituitarismo congênito que se manifesta com déficit de GH (hormônio de crescimento), TSH (hormônio tireoestimulante), PRL (prolactina), gonadotrofinas (FSH e LH), e déficit variável e progressivo de ACTH. O gene PROP1 é responsável pelo deslocamento de células tronco/progenitoras da zona marginal para dentro do lobo anterior da hipófise onde elas irão se diferenciar. Esse gene é altamente conservado entre as espécies e é responsável direta ou indiretamente pela produção e secreção de hormônios hipofisários. A dissertação de mestrado da aluna de Mestrado Caroline Caetano Silva defendida na disciplina de endocrinologia do HCFMUSP teve como objetivo gerar um modelo animal zebrafish com variante alélica patogênica no gene prop1, e a iniciação científica da Aluna Débora Bissegatto teve o objetivo de fazer a caracterização auxológica e molecular do modelo com nocaute no período larval. Nessa fase observvou-se uma redução do tamanho do peixe com variante deletéria quando comparado com o selvagem com 13 dias após fertilização, sendo restaurado o crescimento em 20dpf. A expressão gênica evidenciou uma diminuição do fator de transcrição hipofisário pit1 e do transcrito do hormônio hipofisário gh1 durante o desenvolvimento larval. O presente estudo se propõe a fazer caracterização fenotípica, no seu aspecto de fertilidade e crescimento, do modelo animal portador de variante alélica no gene prop1 na vida adulta. Foram avaliados os transcritos dos hormônios hipofisários gh1, lh, fsh e tsh e também foi feita a comparação da quantidade de ovos postos, além da medição do tamanho dos animais adultos. Não houve diferença significativa entre os grupos, mostrando que o animal gerado tem o fenótipo restaurado de forma espontânea
Title in English
Phenotypic characterization of zebrafish (Danio rerio) with a knockout in the prop1 gene generated by the CRISPR/Cas9 genomic edition in adulthood
Keywords in English
CRISPR associated protein 9
Fertility
Hypophysis
Hypopituitarism
Zebrafish
Abstract in English
Congenital hypopituitarism is defined as the deficiency of one or more pituitary hormones and may occur due to mutations in transcription factors involved in pituitary embryogenesis. In humans, pathogenic allelic variants in PROP1 are the most common cause of congenital hypopituitarism that manifests with deficits in GH (growth hormone), TSH (thyroid-stimulating hormone), PRL (prolactin), gonadotropins (FSH and LH), and variable and progressive ACTH. The PROP1 gene is responsible for the displacement of stem/progenitor cells from the marginal zone into the anterior lobe of the pituitary gland where they will differentiate. This gene is highly conserved across species and is directly or indirectly responsible for the production and secretion of pituitary hormones. The master's thesis of Master's student Caroline Caetano Silva defended in the discipline of endocrinology at HCFMUSP aimed to generate a zebrafish animal model with a pathogenic allelic variant in the prop1 gene, and the scientific initiation of Student Débora Bissegatto aimed to make the auxological characterization and molecular of the model with knockout in the larval period. In this phase, a reduction in the size of the fish with the deleterious variant was observed when compared to the wild type at 13 days after fertilization, with restoration in the size at 20dpf. Gene expression showed a decrease in the pituitary transcription factor pit1 and the pituitary hormone gh1 transcript during larval development. The present study proposes to carry out a phenotypic characterization in terms of fertility and growth features in an animal model carrying an allelic variant in the prop1 gene in adulthood. The transcripts of the pituitary hormones gh1, lh, fsh and tsh were evaluated and the amount of eggs laid was also compared, in addition to measuring the size of the adult animals. There was no significant difference between the groups, showing that the generated animal has the phenotype spontaneously restored
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Publishing Date
2023-08-15