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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.6.2014.tde-22082014-095912
Documento
Autor
Nome completo
Francisco Miroslav Ulloa Stanojlovic
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2014
Orientador
Banca examinadora
Matte, Maria Helena (Presidente)
Razzolini, Maria Tereza Pepe
Sato, Maria Inês Zanoli
Título em português
Detecção Molecular de Giardia spp. em amostras de esgoto bruto provenientes do Estado de São Paulo e da cidade de Lima, Peru
Palavras-chave em português
Biologia Molecular
Genotipagem
Giardia intestinalis
Protozoários Re-emergentes
Saúde Pública
Resumo em português
Introdução Giardia intestinalis é um dos principais protozoários flagelados causadores de diarreia em humanos e animais, sendo um micro-organismo re-emergente, responsável por vários surtos de veiculação hídrica em nível mundial, razão pela qual tem merecido atenção das autoridades de Saúde Pública, e deve ser avaliado e monitorado, principalmente devido ao seu impacto negativo na qualidade do abastecimento público, em particular através do esgoto. Através de técnicas de biologia molecular é possível caracterizar e genotipar cistos presentes no esgoto, e identificar a circulação dos agrupamentos A e B, patogênicos para o homem. Neste estudo foram avaliadas amostras de esgoto bruto de cidades cosmopolitas da América Latina, no Estado de São Paulo, e em Lima, Peru. Objetivos Detectar através da técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR) a presença de G. intestinalis e os agrupamentos A e B, de importância para a saúde humana, em amostras de esgoto bruto provenientes do Estado de São Paulo, Brasil e de Lima, no Peru. Material e Métodos Um total de 18 amostras de esgoto bruto provenientes de portos, aeroportos e estações rodoviárias, com alto trânsito de pessoas de cinco municípios do estado de São Paulo foram coletadas pela técnica de Moore. Adicionalmente, 10 amostras provenientes de dois bairros (urbano e semi-urbano) na entrada da ETE de Carapongo, Lima, no Peru foram coletadas e concentradas por centrifugação. O DNA genômico foi extraído utilizando kit comercial (QIAamp DNA Stool Mini Kit® - Qiagen, USA). A amplificação do gene gdh (glutamato desidrogenase) de Giardia, foi realizada por nested PCR como descrito por CACCIÓ et al., 2008, e G. intestinalis e seus agrupamentos A e B, por meio de reações de reamplificação por PCR (rePCR). Resultados No Estado de São Paulo 61,1 por cento (11/18) das amostras coletadas foram consideradas positivas para G. intestinalis, e na cidade de Lima 60 por cento (6/10) das amostras foram positivas para G. intestinalis. Os agrupamentos A e B foram obtidos em ambos os países. Conclusões Os achados indicam que na cidade de Lima e no estado de São Paulo, cistos de Giardia associados à giardíase humana estão circulando no esgoto bruto, de modo que a descarga dessa matriz em águas superficiais pode representar perigo para a saúde. Além disso, o diagnóstico proposto possibilita a caracterização molecular de Giardia presente em amostras de esgoto bruto sem a necessidade de sequenciamento ou clonagem, favorecendo as rotinas laboratoriais
Título em inglês
Molecular detection of Giardia spp. in samples of raw wastewater from the State of São Paulo and the city of Lima, Peru.
Palavras-chave em inglês
Genotyping
Giardia intestinalis
Molecular Biology
Protozoa Re-emerging
Public Health
Resumo em inglês
Introduction Giardia intestinalis is on of the major flagellated protozoans that cause diarrhea in humans and animals, and a re-emerging microorganism, responsible for several waterborne outbreaks worldwide, therefore it has received attention from public health authorities, and should be evaluated and monitored mainly due to their negative impact on the quality of public supply, in particular through the sewage. Through molecular biology techniques it is possible to characterize and to genotype cysts present in wastewater, and to identify the circulation of Assemblages A and B, that are pathogenic to humans. In this study were evaluated samples of raw wastewater from cosmopolitan cities in Latin America, in the State of São Paulo and in Lima, Peru. Objectives Detect, through the technique of polymerase chain reaction (PCR), the presence of G. intestinalis and its Assemblages A and B, of importance to human health, in samples of raw wastewater from the State of São Paulo, Brazil and Lima, Peru. Material and Methods A total of 18 samples of raw wastewater from harbors, airports and bus stations, with high traffic of people from five municipalities of the state of São Paulo were collected by the technique of Moore. In addition, 10 samples from two districts (urban and semi-urban) at the entrance of the WWTP Carapongo, Lima, Peru, were collected and subjected to centrifugation. Genomic DNA was extracted by using a commercial kit (QIAamp DNA Stool Mini Kit ® - Qiagen, USA). The amplification of the Giardia gdh gene (glutamate dehydrogenase) was performed by nested PCR as described by Cacció et al., 2008 and G. intestinalis and its Assemblages A and B, through PCR reamplification reactions (rePCR). Results In the State of São Paulo 61.1 per cent (11/18) of the collected samples were positive for G. intestinalis, and in the city of Lima 60 per cent (6/10) of the samples were positive for G. intestinalis. Assemblages A and B were obtained in both countries. Conclusions The findings indicated that in the city of Lima and in the state of São Paulo, Giardia cysts associated with human giardiasis are circulating in raw wastewater, so that the discharge of this matrix in surface waters may pose a health hazard. Furthermore, the proposed diagnostic enables the molecular characterization of Giardia present in raw wastewater samples without the need of sequencing or cloning, favoring laboratory routines.
 
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Data de Publicação
2014-09-01
 
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