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Tese de Doutorado
DOI
Documento
Autor
Nome completo
Tamires Amabile Valim Brigante
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2019
Orientador
Banca examinadora
Oliveira, Danielle Palma de (Presidente)
Hallak, Jaime Eduardo Cecilio
Monesi, Nadia
Oliveira, Gisele Augusto Rodrigues de
Oliveira, Rhaul de
Santos, Antonio Cardozo dos
Título em português
Avaliação de toxicidade de psicofármacos com potencial terapêutico
Palavras-chave em português
Avaliação de Toxicidade
Canabidiol; Ayahuasca
Zebrafish
Resumo em português
O canabidiol (CBD) é um composto encontrado na espécie Cannabis sativa que já teve sua eficácia reconhecida para o tratamento de epilepsia grave, além de atualmente ser estudado para o tratamento de diversas doenças do sistema nervoso. Medicamentos à base de canabidiol já são utilizados em diversos países. No Brasil, a liberação tem sido discutida e com importantes avanços desde 2014. A Ayahuasca é um chá psicoativo originário da Amazônia, amplamente utilizado por tribos indígenas e seitas religiosas. A Ayahuasca tem sido recentemente estudada por seu amplo potencial terapêutico para tratar distúrbios psiquiátricos, como ansiedade, depressão, vícios em drogas de abuso e doenças degenerativas. Dentro deste contexto, para garantir a segurança da população que poderá fazer uso dessas substâncias é essencial que estudos de toxicidade sejam realizados. Para avaliar a toxicidade intrínseca das substâncias foram realizados ensaios de neurotoxicidade e teratogenicidade. O organismo-teste utilizado para estes ensaios foi o zebrafish devido a diversas vantagens apresentadas por este organismo, sendo as principais delas, a transparência do córion e da larva que permite a observação das estruturas internas, e a semelhança do código genético com de mamíferos. Desta forma, o presente trabalho visa fornecer subsídios para a avaliação da segurança do CBD, de um derivado sintético de CBD e ayahuasca, por meio da avaliação de toxicidade utilizando abordagens diferentes empregando embriões de zebrafish. A acetilcolinesterase (AChE) é uma enzima envolvida nas vias de neurotransmissão sináptica. Sua atividade tem sido amplamente utilizada como biomarcador em estudos de neurotoxicidade. A AChE é expressa cedo em zebrafish, desde o estágio embrionário. Neste trabalho, a atividade da AChE foi avaliada pelo teste de Ellman adaptado para microplaca. Um planejamento experimental foi utilizado para otimizar o preparo de amostra para essa análise. DanioScope é um software que permite avaliar alterações morfológicas e comportamentais precoces no zebrafish. O uso deste software no laboratório foi implementado e padronizado pelo desenvolvimento deste trabalho. Nenhuma malformação foi observada na análise morfológica de embriões expostos a todas as concentrações testadas de CBD e derivado sintético de CBD. No entanto, houve atraso na eclosão após exposição ao CBD (EC50 = 754 ?g/L) e após a exposição ao derivado sintético do CBD (EC 50 = 776 ?g/L). Além disso, a exposição a estes canabinóides resultou em aumento da atividade motora em 24 hpf com LOEC para a exposição ao CBD de 20 ?g/L e ao derivado sintético do CBD, LOEC de 70 ?g/L). Esta diferença encontrada na atividade motora não se mantes nos demais períodos avaliados. Os embriões expostos ao CBD não apresentaram diferenças na atividade da acetilcolinesterase. A exposição à Ayahuasca na maior concentração testada (1000 ppm) resultou em redução da taxa de embriões com bexiga natatória inflada (<10%). Além disso, esta concentração de ayahuasca afetou o desenvolvimento dos olhos já que a medida da área dos olhos mostrou-se reduzida nos embriões expstos à esta concentração. Em menores concentrações, a exposição à ayahuasca não alterou o desenvolvimento dos embriões no período testado.
Título em inglês
Toxicity assessment of psychofarmaceutical drugs with therapeutic
Palavras-chave em inglês
Cannabidiol; Ayahuasca
Toxicity Assessment
Zebrafish
Resumo em inglês
Cannabidiol is a compound found in the Cannabis sativa species that has already been recognized for the treatment of severe epilepsy and is currently being studied for the treatment of various diseases of the nervous system. Cannabidiol medicines are already used in several countries. In Brazil, liberation has been discussed and it had important advances since 2014. Ayahuasca is a psychoactive tea originating in the Amazon, widely used by indigenous tribes and religious sects. Ayahuasca has recently been studied for its broad therapeutic potential for treating psychiatric disorders such as anxiety, depression, addiction to drugs of abuse and degenerative diseases. In this context, it is essential for toxicity studies to be carried out to ensure the safety of the population that can use these substances. Neurotoxicity and teratogenicity tests were performed to assess the intrinsic toxicity of the substances. The test organ used for these tests was zebrafish due to several advantages presented by this organism, the main ones being the transparency of the chorion and the larva that allows observation of the internal structures and the similarity of the genetic code with that of mammals. Thus, the present work aims to provide subsidies for the safety assessment of CBD, a synthetic derivative of CBD and ayahuasca, through the evaluation of toxicity using different approaches employing zebrafish embryos. Acetylcholinesterase (AChE) is an enzyme involved in synaptic neurotransmission pathways. Its activity has been widely used as a biomarker in neurotoxicity studies. AChE is expressed early in zebrafish, from the embryonic stage. In this work, the activity of AChE was evaluated by the Ellman's test adapted for microplate. An experimental design was used to optimize sample preparation for this analysis. DanioScope is a software that allows to evaluate early morphological and behavioral changes in zebrafish. The use of this software in the laboratory was implemented and standardized by the development of this work. No malformation was observed in the morphological analysis of embryos exposed to all tested concentrations of CBD and synthetic CBD derivative. However, there was delay in hatching after exposure to high concentrations of CBD (EC50 = 754 ?g / L) and after exposure to the synthetic CBD derivative (EC 50 = 776 ?g / L). In addition, exposure to these cannabinoids resulted in increased motor activity in 24 hpf with LOEC for exposure to CBD of 20 ?g / L and synthetic derivative of CBD (LOEC of 70 ?g / L). This difference in motor activity was not observed in the other periods evaluated. Embryos exposed to CBD showed no differences in acetylcholinesterase activity. Exposure to Ayahuasca at the highest concentration tested (1000 ppm) resulted in a reduction in the rate of embryos with inflated swim bladder (<10%). In addition, this concentration of ayahuasca affected the development of the eyes since the measurement of the eye area was reduced in the embryos exposed to this concentration. At lower concentrations, exposure to ayahuasca did not alter the development of the embryos during the tested period.
 
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Data de Liberação
2021-09-03
Data de Publicação
2019-11-11
 
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