Foram realizados ensaios, em casa-de-vegetação, a fim de se observar efeitos do meio ambiental sobre o complexo simbiótico Azolla-Anabaena. Baseado em estudos da atividade da nitrogenase, propôs-se uma metodologia para medidas in situ, na qual não ocorre perturbação no ambiente de desenvolvimento da Azolla. Concluiu-se que a metodologia proposta é viável. Espécies de Azolla foram submetidas a 3 níveis de pH em solução nutritiva. Constatou-se diferenças varietais, sendo que as espécies que se mostraram mais tolerantes à acidez foram a A. microphylla e A. filiculoides pelo maior acúmulo de nitrogênio na matéria seca e produção de biomassa, enquanto que A. nilótica foi a mais sensível. A variação da atividade da enzima nitrogenase foi correlacionada com a intensidade luminosa e temperatura diurna, obtendo-se o ponto de máxima atividade diurna. Azolla caroliniana foi marcada com ¹⁵N em solução a 4% átomos ¹⁵N, na forma de uréia (100 ppm de N), obtendo-se material marcado a 2,81% átomos ¹⁵N, o qual foi incorporado a solo Terra Roxa Estruturada. Após um período de três semanas, plantou-se arroz (IAC-1278), sob regime de inundação. Para se determinar as taxas de recuperação, pelo arroz, do nitrogênio da Azolla incorporada ao solo, dois métodos foram utilizados: método direto, onde incorporou-se Azolla caroliniana marcada (2,81% át. ¹⁵N), em duas doses (10 e 20g de matéria fresca por vaso), além do controle sem incorporação e indireto, utilizando-se solo TRE marcado a 0,7% ¹⁵N, já estabilizado, ao qual foi incorporada Azolla caroliniana não marcada, nas mesmas doses do método direto. Através do método direto foi determinada uma recuperação de 11 e 13% respectivamente, para a maior e menor dose de Azolla incorporada. Este método mostrou-se ser o mais preciso em comparação com o método indireto que, pela grande variabilidade nas medidas não é recomendado para este tipo de determinação.

Experiments were carried out under greenhouse conditions to study, environmental effects on the Azolla-Anabaena association. The need of an appropriate method to measure the nitrogenase activity of Anabaena was discussed, as well as the purpose of a method for in situ measurements. The method showed more accuracy and can be applied to routine analyses. Varietal differences were observed and A. microphylla and A. filiculoides were the most tolerant species to low pH solution. They showed the highest biomass production and N accumulation in dry matter. A nilotica was the most sensitive species to pH. Azolla caroliniana was labelled by using ¹⁵N-urea (100 ppm) in solution at 4% atom ¹⁵N excess. Fresh Azolla at enrichment of 2.81% atom ¹⁵N in plant tissue, was incorporated (10 and 20g fresh weight per pot) to an Oxic Paleudalf Soil (Terra Roxa Estruturada and incubated for 3 weeks. Rice (IAC-1278 variety) seeds were sown and flooded after emergence. Two methods were used to follow the N-Azolla recovery in rice: (a) direct method, incorporating labelled Azolla (2.81% atom ¹⁵N excess) and (b) indirect method, using labelled soil (0.7 % atom ¹⁵N excess) and unlabelled Azolla. The recovery of N averaged 13% and 11% when 10 and 20g of Azolla per pot were used, respectively. Measurement errors by using direct method was averaged 10% and 13% for 10 and 20g of Azolla, respectively. The indirect method gave errors higher than 50%. The direct method showed, therefore, to be more accurate under this experimental condition.